フォスファチジルセリン輸送性ATPaseの作動機構と開口放出における意義

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16657038
• 研究機関: 岡山大学
• 研究代表者: 森山 芳則 岡山大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 教授 (10150658)
• 研究分担者: 大塚 正人 岡山大学, 自然生命科学研究支援センター, 助手 (30243489)
• キーワード: ATPase / フリップフロップ / 小胞輸送 / エキサイトーシス / PS / リン脂質 / シナプス小胞 / リポソーム

研究概要

シナプス小胞が開口放出される際、フォスファチジルセリン(PS)が脂質二重層の上層部に集積し融合を促進すると考えられている。このPSの膜内での輸送を司っていると考えられているのがPS依存性ATPaseである。本研究はこのPS依存性ATPaseの生化学的・細胞生物学的性質を明らかにすることを目的としている。成果は以下にまとめた。
(1)PS依存性ATPaseをコードするcDNAをラット脳よりクローン化し、昆虫細胞を用いた発現系を構築した。
(2)上記の発現系を用いて野生型ならびに変異型ATPaseを精製した。現在、その生化学的性質を解析中である。
(3)PS依存性ATPaseに対する特異的モノクローン抗体2E6を作製した。Synaptophysinとの2重ラベル免疫電子顕微鏡法によりPS依存性ATPaseが確かにシナプス小胞に存在していることを証明した。
(4)この抗体をPC12細胞に注入したところ分泌顆粒の開口放出が部分的に阻害された。
以上の結果はPS依存性ATPaseは開口放出において本質的に重要であることを強く示唆している。

研究成果

• [雑誌論文] Vesicular storage and secretion of L-glutamate from glucagon-like peptide 1-secreting clonal intestinal L cells. (2006)
  • 著者名/発表者名: Uehara, S., Jung, S.K., Morimoto, R., Arioka, S., Miyaji, T., Juge, N., Hiasa, M., Shimizu, K., Ishimura, A., Otsuka, M., Yamamoto, A., Maechler, P., Moriyama, Y.
  • 雑誌名: J.Neurochem. 96 ページ: 550-560
• [雑誌論文] Identification of essential amino acid residues of the NorMNa^+/multidrug antiporter in Vibrio parahaemolyticus. (2005)
  • 著者名/発表者名: Otsuka, M., Yasuda, M., Morita, Y., Otsuka, C., Tsuchiya, T., Omote, H., Moriyama.Y.
  • 雑誌名: J.Bacteriol. 187 ページ: 1552-1558
• [雑誌論文] A human transpoter protein that mediates the final excretion step for toxic organic cations. (2005)
  • 著者名/発表者名: Otsuka, M., Matsumoto, T., Morimoto, R., Arioka, S., Omote, H., Moriyama, Y.
  • 雑誌名: Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102 ページ: 17923-17928
• [雑誌論文] Proteolipid of vacuolar H^+-ATPase of Plasmodium, falciparum : cDNA cloning, gene organization and complementation of a yeast null mutant. (2005)
  • 著者名/発表者名: Yatsushiro, S., Taniguchi, S., Mitamura, T., Omote, H., Moriyama, Y.
  • 雑誌名: Biochim.Biophy.Acta 1717 ページ: 89-96