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哺乳類の卵はその成熟過程で活発にmRNAを合成した後、遺伝子発現を停止する。その後、受精により刺激を受け一連のプログラムに従い遺伝子発現が開始され胚発生を進行する。しかし、大量に蓄積された母性由来のmRNAにより従来の方法では新生されたmRNAの解析は困難であり、現在までこの遺伝子発現プログラムについてはほとんど知見が得られていない。
そこで本研究では、新生されるRNAのみを単離することのできる手法を確立し、まず受精後の遺伝子発現プロファイルを作製することを目的として実験を次ののような手法を考案した。受精後の初期胚にBrUTPを加え、合成途中のmRNAに取り込ませることにより新生mRNAをBrUで標識する。抗BrU抗体を用いた免疫沈降法によって新生されたmRNAのみを単離し、それを解析することにより受精後の遺伝子発現プロファイルを作成する。
この手法について先ず始めにBrUTPの胚導入法並びに抗BrU抗体を用いた免疫沈降法についての検討を行った。その結果、免疫沈降後の回収率が約40%であり、非特異的沈降が特異的なものに対して0.5%程度まで下げることが出来た。さらに、BrUTPを導入した胚に発生率、遺伝子発現パターンに異常は見られなかった。次にその最適条件を用いた実験を行って、今までに初期胚で発現することが知られている遺伝子であるeIF-1AのmRNAについてその合成量の変化を明らかにすることができた。今後は実験系のさらなる検証を行い、実際にこの手法を用いて受精後の遺伝子発現プロファイルを明らかにしていく予定である。
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