研究課題
上記研究課題について、今年度の実験計画をほぼ完了したので報告する。ホヤ類は一般に雌雄同体であるが、マボヤを含む多くの種において自家不稔性を示す。獲得免疫系を持たない下等脊索動物であるホヤが、どのような機構で同種異個体細胞を識別しているのかは、大きな謎である。本研究課題では、70kDaの卵黄膜成分HrVC70が精子の卵黄膜への結合と自己非自己識別に重要な役割を果たすことをまず明らかにした。このHrVC70分子は12個のEGF様ドメインにより構成され、分子多型に富み個体間でアミノ酸置換が起こっていること、自己精子よりも非自己精子との結合性が高いこと、自己非自己識別機構が獲得される卵成熟過程で卵黄膜に付着するようになること等から、マボヤにおける自己非自己識別分子の一つであると考えている。この精子側のリガンド分子を、酵母ツーハイブリッド法により探索し、複数の候補分子を同定した。また精子ラフト画分を用いてSDS-PAGEを行い、ニトロセルロースに転写後、ファーウエスタンブロット法によりHrVC70と相互作用する分子を探索した。その結果、GPIアンカー型の新規タンパク質がHrVC70と特異的に相互作用することを見いだした。また、この分子は、自他識別にも関わる可能性があることを示した。一方、HrVC70のホモログがマボヤ以外の種にも存在するか否かは興味ある問題である。そこで、アカボヤを用いて検討したところ、アカボヤ卵黄膜にもHaVC80と命名したVC70ホモログが存在すること、基本構造はよく似ているが、8番目のEGF様ドメインが重複しており、全体として13個のEGFドメインから構成されることが示された。また、カタユウレイボヤにおける自他識別機構についても、遺伝学と分子多型の解析から候補分子の探索を行った。そして3つの候補分子を探すことに成功した。
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New Impact on Protein Modifications in the Regulation of Reproductive System (T.Tokumoto ed.)(Research Signpost) (印刷中)
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