RNAiによるノックダウンウサギ・モデルの開発および動脈硬化研究への応用

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16659099
• 研究機関: 筑波大学
• 研究代表者: 範 江林 筑波大学, 大学院・人間総合科学研究科, 助教授 (60272192)
• 研究分担者: 多比良 和誠 東京大学, 大学院・工学系研究科, 教授 (10261778)
• キーワード: 遺伝子改変ウサギ / 動脈硬化 / 高脂血症 / 動物モデル / 脂質代謝 / CETP / 遺伝子治療 / 実験動物

研究概要

RNAiトランスジェニック(Tg)ベクターを用いて、ノックダウンTgウサギの作製を試みた。まず、small interfering RNA (siRNA)を発現できるようにtRNAプロモーターを用いて、インスレーター配列に挿入されたベクターの作成に成功した。インスレーター配列とは、トランスジーンのpositional effectを防ぐことができる配列である。ノックダウンTgウサギの作製はマウスよりも数段に時間と手間がかかるため、多数のF0の取得が困難である。そこで、インスレーター配列の導入により、得られたF0ウサギのすべてにおいてsiRNAが発現することが期待できる。ノックダウンされる標的遺伝子としては脂質代謝異常や高脂血症、動脈硬化に関わる遺伝子であるコレステロール転送蛋白(CETP)遺伝子の標的配列をスクリーニングして、候補配列を選択した上で、ノックダウンウサギの作製を目指している。
ノックダウンウサギを作る前段階として、導入されるsiRNAによるウサギCETP遺伝子のノックダウン抑制効率をin vitroで評価できるスクリーニング系を確立ことである。CETPは肝臓でしか発現していない遺伝子であるので、siRNAによるCETP遺伝子発現の抑制を調べるには、適切なウサギ肝臓由来の細胞株が必要となる。現在市販されているウサギ肝細胞株は存在しないので、産業技術総合研究所・中西真人氏より16個ウサギ肝細胞株を分与してくれた。これらの細胞株を用いて、CETP遺伝子抑制の評価が可能な細胞株を探っている。

研究成果

• [雑誌論文] Source(s) of CRP in atherosclerotic lesions. (2006)
  • 著者名/発表者名: Fan, J, Chen, YE.
  • 雑誌名: Am J Pathol. 168 ページ: 1054-1066
• [雑誌論文] Macrophage elastase (MMP-12) accelerates the progression of atherosclerosis in transgenic rabbits. (2006)
  • 著者名/発表者名: Liang J, Liu E, Koike T, Yu Y, Kitajima S, Yingji J, Morimoto M, Watanabe T, Sasaguri Y, Watanabe S, Fan J.
  • 雑誌名: Circulation. (In press)
• [雑誌論文] C-reactive protein in atherosclerotic lesions : its origin and pathophysiological significance. (2005)
  • 著者名/発表者名: Sun H, Koike T, Ichikawa T, Hatakeyama K, Shiomi M, Zhang B, Kitajima S, Morimoto M, Watanabe T, Asada Y, Chen YE, Fan J.
  • 雑誌名: Am J Pathol. 167 ページ: 1139-1148
• [雑誌論文] Transgenic rabbits with increased VEGF expression develop hemangiomas in the liver : a new model for Kasabach-Merritt syndrome. (2005)
  • 著者名/発表者名: Kitajima S, Liu E, Morimoto M, Koike T, Yu Y, Watanabe T, Imagawa S, Fan J.
  • 雑誌名: Lab Invest 85 ページ: 1517-1527
• [雑誌論文] Macrophage-derived lipoprotein lipase increases aortic atherosclerosis in cholesterol-fed transgenic rabbits. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ichikawa T, Liang J, Kitajima S, Koike T, Wang X, Sun H, Morimoto M, Shikama H, Watanabe T, Yamada N, Fan J.
  • 雑誌名: Atherosclerosis. 179 ページ: 87-95
• [雑誌論文] Enhanced atherosclerosis in WHHL transgenic rabbit expressing lipoprotein lipase. (2005)
  • 著者名/発表者名: Koike T, Liang J, Shiomi M, Ichikawa T Wang X, Sun H, Shikama H, Watanabe T, Liu G, Fan J.
  • 雑誌名: Cardiovasc Res. 65 ページ: 524-534