リガンド依存性・非依存性のエストロゲン受容体活性化と核内分布変化を可視化する試み

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16659444
• 研究機関: 山形大学
• 研究代表者: 倉智 博久 山形大学, 医学部, 教授 (40153366)
• 研究分担者: 中原 健次 山形大学, 医学部, 講師 (80250934) ; 五十嵐 秀樹 山形大学, 医学部, 助手 (80333970)
• キーワード: エストロゲン受容体 / エストロゲン / 上皮成長因子(EGF) / インスリン様増殖因子(IGF)-1 / 欠失変異 / シグナル伝達 / 核内分布

研究概要

エストロゲン受容体(ER)は、エストロゲン(E2)と結合すると核内での分布が変化し、これはE2の作用発現(ERの活性化)に重要であると考えられている。一方、ERは上皮成長因子(EGF)やインスリン様増殖因子-1(IGF-1)でも活性化され、事実これらの増殖因子はエストロゲン様作用を発揮する。しかし、増殖因子によるERの核内分布の変化について検討した報告は世界的にもない。本年度も、昨年に続いて、乳癌細胞であるMCF-7細胞に、GFP-ERα(GFP-ER)またはERαのactivation function 2(AF2)領域を欠失したGFP-mutant ERα(GFP-mtER)をトランスフェクションした。共焦点レーザー顕微鏡でE2およびEGF、IGF-1によるGFP-ERおよびGFP-mtERの分布の変化を観察した。さらにEGFとIGF-1の細胞内シグナル伝達経路の阻害剤であるMEK inhibitor(PD98059)とPI3 kinase inhibitor(LY294002)前投与の影響も検討した。GFP-ERは核内に均一に存在し、E2投与後10分で核内分布が不均一な集積を呈した。EGF投与後30から60分でGFP-ERの分布がリガンド投与と同様に変化し、PD98059を前投与するとこの変化はおこらなかった。IGF-1投与でもERの分布は変化し、LY294002を前投与するとこの変化が観察されなかった。またGFP-mtERでは、E2およびEGF、IGF-1投与で核内分布の変化が観察されなかった。EGFやIGF-1によるERの核内分布の変化がはじめて確認された。さらに、この現象には、MAP kinaseとPI3 kinase-Akt系が関与し、AF2領域が必要であることが示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Growth factors change nuclear distribution of estrogen receptor-α via mitogen-activated protein kinase or phosphatidylinositol 3-kinase cascade in a human breast cancer cell line. (2005)
  • 著者名/発表者名: Takahashi T, Ohmichi M, Kawagoe J, Ohshima C, Doshida M, Ohta T, Saitoh M, Mori-Abe A, Du B, Igarashi H, Takahashi K, Kurachi H
  • 雑誌名: Endocrinology 146(9) ページ: 4082-4089