TLRシグナル伝達を決定するTIRドメイン間の相互作用の立体構造学的研究

2004 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16770079
• 研究機関: 横浜市立大学
• 研究代表者: 杤尾 豪人 横浜市立大学, 大学院・総合理学研究科, 助手 (70336593)
• キーワード: 自然免疫 / MyD88 / Toll様受容体 / NMR

研究概要

本研究では、自然免疫機構の分子生物学的及び立体構造学的解明を目指し、MyD88の蛋白立体構造及び機能の解析を行なっている。
溶液NMRで立体構造決定を行なうために、^<13>C,^<15>Nで標識したMyD88 TIRドメインを調製した。この試料を用い、各種多核多次元核磁気共鳴(NMR)測定を行なった。現在までに、MyD88 TIRドメイン内の各^1H,^<13>C,^<15>N核の化学シフトの帰属を90%完了した。これらのデータと各種三次元NOESY測定から得られる距離情報から、MyD88 TIRドメインの二次構造要素を決定した。その結果は、既に構造が解かれているTLR1やTLR2のTIRドメインと良く一致しているが、ループ部分の長さなどに差異が見られた。現在、これらのデータを合わせて、立体構造計算を行なっている。
本研究では、MyD88に結合し、自然免疫系のシグナル伝達経路を決定づける各種蛋白質とMyD88 TIRの相互作用解析も行なう。現在、MyD88 TIRドメインと相互作用が指摘されている蛋白質のうち、TLR1、TLR2、IL-18Rβ、TIRAPについて全長またはTIRドメインの大量調製に成功している。現在、in vitro結合実験を行なっている。

研究成果

• [雑誌論文] Structure of the UBA Domain of Dsk2p in Complex with Ubiquitin : Molecular Determinants for Ubiquitin Recognition. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ohno, A., Jee J.G., Fujiwara, K., Tenno, T., Goda, N., Tochio, H., Kobayashi, H., Hiroaki, H., Shirakawa, M.
  • 雑誌名: Structure (印刷中)
• [雑誌論文] Intracellular phosphate serves as a signal for the regulation of the PHO pathway in Saccharomyces cerevisiae. (2004)
  • 著者名/発表者名: Auesukaree C, Homma T, Tochio H, Shirakawa M, Kaneko Y, Harashima S.
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry 279,17 ページ: 17289-17294
• [雑誌論文] Structure of the ubiquitin-interacting motif of S5a bound to the ubiquitin-like domain of HR23B. (2004)
  • 著者名/発表者名: Fujiwara K, Tenno T, Sugasawa K, Jee JG, Ohki I, Kojima C, Tochio H, Hiroaki H, Hanaoka F, Shirakawa M.
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry 279,6 ページ: 4760-4767
• [雑誌論文] Structural basis for distinct roles of Lys63- and Lys48-linked polyubiquitin chains. (2004)
  • 著者名/発表者名: Tenno, T., Fujiwara, K., Tochio, H., Iwai, K., Morita, E.H., Hayashi, H., Murata, S., Hiroaki, H., Sato, M., Tanaka, K., Shirakawa, M.
  • 雑誌名: Genes to Cells 9 ページ: 865-875
• [雑誌論文] High-throughput construction method of expression vector of peptides for NMR study suited for isotopic labeling. (2004)
  • 著者名/発表者名: Tenno, T., Goda, N., Tateishi, Y., Tochio, H., Mishima, M., Hayashi, H., Shirakawa, M., Hiroaki, H.
  • 雑誌名: Protein Eng Des Sel 17 ページ: 305-314