| 研究概要 |
細胞膜結合型グルタチオン転移酵素は、細胞内異物に対する解毒作用や脂肪の酸敗の主因である脂質ヒドロペルオキシドに対する還元作用のほか、アラキドン酸カスケードで合成される生理活性物質であるロイコトリエンやプロスタグランジンE_2の合成を触媒する機能を併せ持つことが知られている。細胞膜結合型グルタチオン転移酵素は喘息や炎症に対する薬剤ターゲットになる可能性があるため、その立体構造は薬剤探索において重要な情報を与える。本研究では、細胞膜結合型グルタチオン転移酵素のX線結晶構造解析を行い、構造と必要な機能解析から酵素活性機構の解明を目指す。これまでに、マウス由来の細胞膜結合型グルタチオン転移酵素(MGST1,-2,-3)について、大腸菌にタンパク質を発現させ、タンパク質の安定化のための界面活性剤の探索を含めた精製法の検討を行い、従来法のほか立方液晶相を利用して結晶化条件の探索を行った。その結果、MGST-1については複数の条件下で微結晶の析出に成功したが、X線回折実験の結果から、結晶は低分解能(約15Å)の反射しか与えず、現段階では構造解析には至っていない。現在、構造解析に適した質および大きさの結晶を得るために、添加剤等のスクリーニングを行うとともに、MGST-1以外のホモログ(MGST-2,-3)についても同様に結晶化条件のスクリーニングを試みている。また、細胞膜結合型グルタチオン転移酵素は、基質特異性が広い特性をもつことが知られているので、酵素と種々のインヒビターとの複合体の調製を行い、結晶化条件のスクリーニングを行っている。
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