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出芽酵母複製チェックポイント因子であるMrc1及びTof1は、S期中において複製複合体の構成因子で、複製複合体の安定化に機能することが明らかになっている。今回、新たにTof1と相互作用する因子としてCsm3を見出し、Csm3がMrc1やTof1と同様に複製複合体の安定化に機能することを明らかにした。3因子の欠損株の解析から、Tof1及びCsm3は、協調的にMcmヘリカーゼを介して複製フォークに作用し機能すること、またMrc1は、Tof1及びCsm3が欠損すると複製フォークとの相互作用が不安定になることから、Tof1/Csm3複合体依存的に複製フォークと相互結合することが明らかとなった。Mrc1及びTof1は、ヒドロキシウレアによるDNAチェックポイント活性化時においてMec1やRad53キナーゼによりリン酸化修飾を受けることを明らかにした。このリン酸化した因子が、複製チェックポイント活性化に伴う複製フォークの進行の制御に機能する可能性が考えられる。さらに、詳細なタンパク質自体の制御領域を明らかにするため、Mrc1、Tof1のN末端及びC末端から部分欠損変異株を作製した。その解析から、Mrc1は、C末端側に複製フォークに含まれるMcmヘリカーゼとの相互作用領域とN末端側にMec1との作用領域及びRad53活性化領域が存在することを示唆する結果が得られた。また、Tof1は、532-828アミノ酸領域内にCsm3及びMcmヘリカーゼと相互作用する領域が存在することが明らかとなった。現在、詳細な機能領域の決定及び複製フォーク安定化機構を解明するため、解析を進めている。
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