| 研究概要 |
これまでの家族内発症の患者や疾患モデル動物における遺伝学的研究から、レクチン型受容体が密集している染色体領域NKC(Natural Killer gene Complex,ヒト染色体12p13マウス染色体6)が自己免疫疾患の発症や感染症に対する抵抗性や移植後の拒絶反応と関係していると考えられている。樹状細胞は抗原提示細胞であり、自己免疫疾患や感染症や移植において重要な役割を果たしているが、NKCには樹状細胞に発現している受容体も多数存在し、その多くは未だにリガンドも機能もほとんど知られていない。本研究の目的はまず樹状細胞の受容体のリガンドを同定する事であり、そしてそのリガンド認識の疾患に及ぼす影響を解明することである。従来は疾患感受性染色体領域にある遺伝子がコードする分子の機能の解析が行われてきたが、自己免疫疾患などの多因子疾患ではその分子の機能はリガンドによっても影響を受ける可能性があるので、このような方法をとっている。レクチンは極めて貼り付きやすい性質を持っているため、レポータージーンアッセイは従来の遺伝子組み替え型可溶性蛋白や細胞生物学的実験系を用いた方法よりも信頼性が高く、最適の方法である。NKCに遺伝子座を持つ樹状細胞の受容体の細胞外部分と膜貫通部分にCD3ζ鎖の細胞質部分を繋いだキメラ分子をコードするコンストラクトをRT-PCR法により作成している。NFATで働くLacZレポータージーンのトランスフェクトされているレポーター細胞を用いる予定であったが、LacZよりも感度のよいルシフェラーゼやより簡便なGFPを用いたレポーター細胞も作成中である。これらのレポーター細胞に上記のコンストラクトをトランスフェクトすることにより、エフェクター細胞を作成しているところである。
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