|
1)脂肪細胞において概日リズム発現を認めた因子についてのプロモーター解析。
初年度に検討した脂肪細胞に発現する遺伝子(AP-1、c-fos、c-jun、c-myc、fra-1、C/EBPα、C/EBPδ、PPARγ、PPARα、PPARδ、RORs、RAR、LXRα、ERRs、PGC1、SREBP1など)のなかで、real time quantitative RT-PCR法にて概日リズム発現を認めたものについて、そのプロモーター領域をクローニングし解析した。時計遺伝子で制御されている可能性が高く、E-boxの有無やCLOCK/BMAL1による制御の有無、RevREの有無について、一過性発現系によるレポーターアッセイを用いて検討した。
2)上記1)の中で、核内受容体であるPPARδ、SHPについては、一過性発現系によるレポーターアッセイによるプロモーター解析の結果、CLOCK/BMAL1による転写活性化が明らかとなった。またゲルシフトアッセイにて、CLOCK/BMALのプロモーターへの直接結合が確認できた。特に興味深いことに、SHPについては、その転写活性化因子とCKOCK/BMALの間に直接の相互作用が存在することが示唆される結果を得た。しかし概日リズムを持った発現をしていてもプロモーター解析の結果はCLOCK/BMAL1による制御を受けていないものもあった。以上の結果については平成18年5月に開催される第79回内分泌学会学術総会にて発表予定である。
|
