| 研究概要 |
対象となる18q領域の中で、PCRをかけるマイクロサテライトマーカーを、約50等分(約1cMごと)する領域をカバーするように配置決定した。食道癌臨床検体48症例(内訳:stage1 10例 stage2 15例 stage3 15例 stage4 8例)の癌部あるいは非癌部のゲノムDNAを抽出した。マイクロサテライトマーカーのForword primerには、蛍光標識(6FAM, VIC, NED, PET,)をつけ、Reverse Primerにはtailingをつけることによって、安定した結果および、同サイズのマーカーでも10種類同時に泳動できるようになった。(コントロールスタンダードは、LIZを用いた)約10000PCRで、泳動はマイクロサテライトを8グループに分け、症例ごとに一度に泳動することにした。
我々はまず、18qのLOHの欠失領域を臨床因子及び予後の異なる食道癌臨床検体48例を用いて同定したい、と考えている。そのうちで、最も臨床病理学的因子(予後、またはT因子、N因子)と関連する領域を解析において、最優先させるべき領域と考えている。現在までに計10000PCRのうち、5000PCRは終了し、アガロースゲルによる予備実験では、バンドが確認されているため、今後Genetic Analyzerへの泳動へ移行していく予定である。LOHの解析については、Gene Mapperのソフトを購入し、解析をオートメーション化の予定である。LOHのみられた領域に関しては、癌抑制遺伝子候補領域として、解析をすすめていきたいと考える。
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