| 研究概要 |
CGH法を用いた肺癌のゲノム構造異常の網羅的解析から、遺伝子増幅に伴う発現亢進を示すSKP2を見出した。非小細胞肺癌臨床検体において、SKP2は腫瘍部特異的に高値を示した。リンパ節転移陽性の症例は、SKP2発現高値群に有意に多く認められ、アンチセンス・オリゴにより肺癌細胞の遊走能、浸潤能は抑制されることを報告した(2004 AJP)。
更に高精度、高密度に肺癌のゲノム異常を解析するために、RP11ライブラリーのBACクローンからDNAを抽出し、制限酵素切断とアダプター接着による無尽化処理の後、アダプターPCR法にて増幅し、アレイにスポッティングして、(1)全染色体を1Mb間隔以下にカバーする約4,500個のBACを配置したアレイ、(2)1p36領域を間断なくカバーしたアレイ、(3)約800種類の癌関連遺伝子に特化したアレイを作製した。
既に確立されているMCA(methylated CpG island amplification)法に基づき、肺癌細胞株LK79のDNAをSmaIにて消化し、次にXmaIで消化した。この平滑末端にアダプターを接着し、アダプターPCR法にて増幅した。これをCy3またはCy5で標識し、上記アレイにハイブリダイゼーションした。その結果、既知のメチル化遺伝子であるMINT26を含むスポットを陽性に検出することができ、BAC array-based MCA(BAMCA)法を標準化することに成功した。
このBAMCA法を用いて細胞株のスクリーニングを開始している。また検出された陽性スポットの中から、特異的にメチル化されている領域を効率よく絞り込む方法として、メチル化DNA結合蛋白質であるMeCP2の抗体を用いたクロマチン免疫沈降法を行い、回収されたゲノム断片をアレイにハイブリダイゼーションする検討を行っている。
以上より、初期の研究目的は達成されたと考える。
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