|
最終年度である本年度は、昨年確立したマウス頭部を固定した状態での恐怖条件付け学習プロトコルを用いて同学習時に起こるアストロサイトの活動をニ光子励起顕微鏡を用いて観測した。アストロサイトの活動は、カルシウムセンサーであるG-CaMP7と環状アデノシン一リン酸センサーであるPinkFlamindoをアストロサイトに発現させて計測した。各センサーの発現には、研究分担者が作製したアデノ随伴ウィルスベクターを用いた。その結果、恐怖条件付け初回から３回目までのフットショック刺激提示後にカルシウムのみならず環状アデノシン一リン酸濃度の上昇があることが認められた。アストロサイトの環状アデノシン一リン酸の上昇は、青斑核からのノルアドレナリン投射同時によって起こり、ベータ１型アドレナリン受容体に依存することが分かった。アストロサイトのカルシウム上昇や環状アデノシン一リン酸上昇は、Gタンパク質共役受容体の活性化により惹起されるが、アストロサイトのGタンパク質共役受容体活性化が学習に影響を与えるのかを試す実験をOpto-Gq系を使って行った。理化学研究所脳科学総合研究センターの平瀬研で作製したBAC-Glt1-OptoA1ARマウスにおいて新奇物体認識試験を行ったところ、記憶時のアストロサイトの活性により記憶の保持が２週間以上続くこと見出した。アストロサイトの活性化を行わなかった動物では二週間後の記憶は保持できなかったことから、アストロサイトが長期的な記憶の保持に有用であることが示された。また、本課題の目標の一つであるtDCSによるニューロピルの反応を調べた結果、グリア細胞の一種であるミクログリアが影響を受けることが昨年度見出したが、今年度は、それらがベータ２型アドレナリン受容体に依存することが分かった。
|
