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2017 年度 実績報告書

機能的3次元組織構築のための統合的バイオファブリケーション

研究課題

研究課題/領域番号 16H02423
研究機関大阪大学

研究代表者

田谷 正仁  大阪大学, 基礎工学研究科, 教授 (60144127)

研究分担者 小嶋 勝  大阪大学, 基礎工学研究科, 助教 (00533647)
境 慎司  大阪大学, 基礎工学研究科, 教授 (20359938)
松永 民秀  名古屋市立大学, 大学院薬学研究科, 教授 (40209581)
研究期間 (年度) 2016-04-01 – 2019-03-31
キーワード再生医療 / 組織工学 / バイオプリンティング / 3Dプリンター
研究実績の概要

前年度の検討にて、これまでに開発していた酵素反応によりゲル化する複数の材料を主成分とする、可視光硬化インク材料を開発する際の設計指針を得ることができていた。本年度は、この成果にもとづいて、可視光硬化インク材料の中から、主にゼラチンとヒアルロン酸誘導体に着目し、肝臓がん細胞、脂肪幹細胞、線維芽細胞および、筋芽細胞を用いて、インクの組成と得られるゲルの力学的特性や分解特性、また、各細胞の増殖、遊走性を評価した。また、脂肪幹細胞に関しては、プリントされたゲル内での脂肪細胞への分化、筋芽細胞については筋細胞への分化も評価した。共焦点レーザー顕微鏡を用いた検討によって、いずれの細胞についても、生存をほとんど損なうことなくゲル内に封入できる条件を見出すことができた。また、細胞毎に、ゼラチンとヒアルロン酸誘導体のそれぞれの組成を制御することによって、ゲル内での増殖・遊走やゲルの分解性をある程度の範囲でコントロールできることが明らかになった。さらに、ハイブリッドプリンターの開発に資する技術として、マイクロ押し出し式と投映式の3Dプリンターのいずれにおいても、問題なく細胞を含んだ構造物を造形できる条件を見出すことができた。また、これらのプリンターを用いて、培養液を流通可能な管腔構造を有するゲル構造物を造形することもできた。これらの造形の点から有望性を見出すことができた条件で作製したゼラチンとヒアルロン酸の混合ゲル構造物中では、脂肪幹細胞は3週間程度、分化能を維持したまま増殖させることができ、さらに脂肪細胞への分化誘導を行うこともできることを、PCRを使った遺伝子発現解析ならびに、フローサイトメーターを使った細胞表面のタンパク質解析により確認することができた。また、筋芽細胞は、筋細胞への分化を示唆する形態変化を示すことを明らかにすることができた。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

当初の予定通り、インクの開発や複数のプリンタに関する検討、および幹細胞を含めた各種細胞を使用した検討が進行しているため。

今後の研究の推進方策

これまでに得られた知見、成果を活かして、当初の目標を達成できるように研究を進める。

  • 研究成果

    (10件)

すべて 2018 2017

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件) 学会発表 (7件) (うち招待講演 5件)

  • [雑誌論文] Visible Light-Induced Hydrogelation of an Alginate Derivative and Application to Stereolithographic Bioprinting Using a Visible Light Projector and Acid Red2018

    • 著者名/発表者名
      Sakai Shinji、Kamei Hidenori、Mori Toko、Hotta Tomoki、Ohi Hiromi、Nakahata Masaki、Taya Masahito
    • 雑誌名

      Biomacromolecules

      巻: 19 ページ: 672~679

    • DOI

      10.1021/acs.biomac.7b01827

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Differentiation potential of human adipose stem cells bioprinted with hyaluronic acid/gelatin-based bioink through microextrusion and visible light-initiated crosslinking2017

    • 著者名/発表者名
      Sakai Shinji、Ohi Hiromi、Hotta Tomoki、Kamei Hidenori、Taya Masahito
    • 雑誌名

      Biopolymers

      巻: 109 ページ: e23080~e23080

    • DOI

      https://doi.org/10.1002/bip.23080

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Drop-On-Drop Multimaterial 3D Bioprinting Realized by Peroxidase-Mediated Cross-Linking2017

    • 著者名/発表者名
      Sakai Shinji、Ueda Kohei、Gantumur Enkhtuul、Taya Masahito、Nakamura Makoto
    • 雑誌名

      Macromolecular Rapid Communications

      巻: 39 ページ: 1700534~1700534

    • DOI

      10.1002/marc.201700534

    • 査読あり
  • [学会発表] 過酸化水素蒸気中での酵素による架橋形成反応にもとづく3Dバイオプリンティング技術の開発2018

    • 著者名/発表者名
      境 慎司,望月佳,田谷正仁
    • 学会等名
      化学工学会 第83年会
  • [学会発表] 微量の過酸化水素を含む空気とHRPを用いた微量押し出し式3D-Bioprinitng技術の開発2017

    • 著者名/発表者名
      望月佳,境慎司,中畑雅樹,田谷正仁
    • 学会等名
      第39回日本バイオマテリアル学会大会
  • [学会発表] Peroxidase-catalyzed microextrusion bioprinting in vaporized ppm-level hydrogen peroxide2017

    • 著者名/発表者名
      Kei Mochizuki, Shinji Sakai, Nakahata Masaki, Masahito Taya
    • 学会等名
      2017 International Symposium of Materials on Regenerative Medicine (ISOMRM)
    • 招待講演
  • [学会発表] Visible light induced alginate-based hydrogel formation catalyzed by ruthenium complex and application to 3D printing2017

    • 著者名/発表者名
      Hidenori Kamei, Touko Mori, Shinji Sakai, Masahito Taya
    • 学会等名
      2017 International Symposium of Materials on Regenerative Medicine (ISOMRM)
    • 招待講演
  • [学会発表] Bioprinting of human adipose stem cell-laden hyaluronic acid/gelatin-based hydrogel constructs through micro-extrusion and visible light-irradiation2017

    • 著者名/発表者名
      Hiromi Ohi、Shinji Sakai、Masahito Taya
    • 学会等名
      2017 International Symposium of Materials on Regenerative Medicine (ISOMRM)
    • 招待講演
  • [学会発表] Drop-on-drop 3D printing through horseradish peroxidase-catalyzed hydrogelation2017

    • 著者名/発表者名
      Shinji Sakai, Kohei Ueda, Masahito Taya, Makoto Nakamura
    • 学会等名
      28th Annual Conference of the European Society for Biomaterials
    • 招待講演
  • [学会発表] Cell-laden hydrogel bioprinting using enzymatic hydrogelation and inkjetting2017

    • 著者名/発表者名
      Shinji Sakai, Gantumur Enkhtuul, Kohei Ueda, Masahito Taya
    • 学会等名
      3rd Latin-America Symposium on Microencapsulation
    • 招待講演

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公開日: 2018-12-17  

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