| 研究課題/領域番号 |
16H02974
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| 研究機関 | 長岡技術科学大学 |
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研究代表者 |
解良 芳夫 長岡技術科学大学, 工学研究科, 教授 (00137168)
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| 研究分担者 |
阿部 勝正 長岡技術科学大学, 工学研究科, 助教 (40509551)
高橋 祥司 長岡技術科学大学, 工学研究科, 教授 (90324011)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 環境技術 / 難分解性有害物 / 微生物分解 / 分解酵素 / 遺伝子 / 遺伝子発現調節 |
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| 研究実績の概要 |
Tris(1,3-dichloro-2-propyl) phosphate (以下TDCPP) や tris(2-chloroethyl) phosphate (以下TCEP)などの塩素を含む有機リン酸トリエステル類は、難分解性で蓄積性もあり、種々の毒性を有する。我々が世界で初めて単離に成功した含塩素有機リン酸トリエステル類分解菌Sphingomonas sp. TDK1 株とSphingobium sp. TCM1 株に存在する初発分解酵素ホスホトリエステラーゼ（HAD）の発現調節機構と分解経路下流酵素をタンパク質レベル、遺伝子レベルで詳細に解析し、分解システムの全容を明らかにするとともに、分解システムの強化をはかり、当該化合物を含む廃水処理や環境保全・修復への応用技術の開発等に必要な基礎を築くことが本研究の目的である。TCM1株を用いて平成30年度に得られた主な結果を以下に示す。
（１）大腸菌で大量発現させた His タグ融合 PDE の金属キレートカラムを用いた精製条件を検討した結果、精製で用いる全緩衝液中に ZnCl2を 50 μM添加することで活性が大幅に回復することが明らかになった。また、本酵素が金属キレートカラムのみで高純度・高収量 (100 mL培養から7.9 mg) で簡便に精製できることも示された。
（２）TDCPP 分解代謝におけるPhoレギュロン転写因子 PhoB の重要性を探るため、phoB 遺伝子破壊株の TDCPP を唯一のリン源とした培地における生育を観察したところ、TCEP の場合と同様に、TDCPP を唯一のリン源とした生育に影響を与えなかった。したがって、分解代謝系酵素遺伝子の基底レベルでの発現もしくは PhoB に依存しない発現機構を有する他の分解酵素による分解代謝により生育が支持されたと考えられた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
Hisタグ融合PDEの金属キレートカラムを用いた精製条件を確立できたこと。phoB遺伝子破壊株の解析が順調に進んでいることなど。
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| 今後の研究の推進方策 |
前年度の研究実績をふまえ、新年度当初に提出する科学研究費助成事業交付申請書の「本年度の研究実施計画」に記載する計画に従って、研究を推進する。
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