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本研究では、引き続きフィードバック阻害の解除およびネガティブレギュレーションの解除に向けて研究を進めた。代謝系における阻害と糖類の取り込みに対する抑制との相互作用とそのフィードバックに関する連携における検討も進めた。通常の微生物では主にPTS経路で等を取り込んでおり、Permease等のシンポーターを介した取り込みは抑制されている。昨年度のリジン生産経路のフィードバック阻害を解除したC. glutamicumを用い、この糖の取り込みに対する阻害の影響に加えて、芳香族合成経路であるシキミ酸生産にについても合わせて検討した。トランスポーター発現を抑制しているiolRを破壊するとその生産量は向上する報告がいくつかされているが、本研究では両者において目立った増加はみられなかった。一方で、リジンから１段階進んだカダベリン生産においては、トランスポーターの抑制の解除の効果が大きく現れた。対してシキミ酸経路の生合成にはあまり影響がないことが確認された。代謝経路に関する様々な遺伝子の発現量を測定したところ、特に目立った変化はみられず、この阻害の解除は遺伝子発現以外の因子が影響していることが同様に示唆された。一方で、大腸菌においても同様の検討を進めた。大腸菌においては遺伝子破壊、特に補充経路の破壊が菌体内のネガティブフィードバックに大きく影響することが明らかとなった。そしてそれは遺伝子発現量にあまり依存しておらず、代謝産物による酵素活性の制御が大きく影響している可能性が示唆された。引き続きこれらマルチ制御の因子の解明に向けて検討を進めることで、複雑な制御の解除に向けた戦略の立案が可能になると期待される。
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