研究課題
真核生物ではPCNAがS期に染色体DNAに装着され、複製進行、染色体再構築を制御する。従来、複製時のPCNA装着は主要なローダーであるRFCによって高頻度でラギング鎖に装着されること明確であったが、リーディング鎖への能動的な装着のしくみは不明であった。我々はRFC類似複合体Ctf18-RFCがリーディング鎖DNAポリメラーゼPolεと複合体になってPCNAローダーとして機能することを示した。さらにこれを使ってPCNA 装着とDNA合成様式の関係を解析した。その結果、この複合体では (Polε/PCNAによる安定な合成→合成の停止とPCNAの解離→Ctf18-RFCによるPCNAの装着→Polε/PCNAによるDNA合成の再開) というサイクルが行われ、安定で長いリーディング鎖が合成されることを示した。つまりリーディング鎖合成では、安定性が十分でないPolεによるDNA合成に対して、結合しているCtf18-RFCによって頻繁にPCNAが装着され安定にDNAが合成される。その結果、リーディング鎖DNAでもPCNAが能動的に装着されることになる。さらに、より完全な複製複合体を得るために複製型ヘリカーゼであるヒトCMG複合体を精製し、DNAポリメラーゼホロ複合体CMG/Polε/Ctf18-RFCの再構築を行った。これを使ってリーディング鎖合成過程でCMG/PolεによるDNA合成とPolε/Ctf18-RFC によるPCNA装着を介した合成再開反応の連係機構の解析を行った。またPCNA脱着を行うと言われているもう一つのRFC類似複合体、ヒトElg1-RFCを精製した。これを使いPCNA脱着反応の再構築を行い、精製タンパク質で脱着の再現が可能であることを示した。以上により複製時のPCNAの装着からその後の適時的なPCNAの脱着を連続的に解析することが可能となった。
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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Exp Cell Res
巻: 377 ページ: 24-35
10.1016/j.yexcr.2019.02.020.
http://seibutsu.biology.kyushu-u.ac.jp/~chromosome/
