| 研究課題/領域番号 |
16H04790
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| 研究機関 | 弘前大学 |
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研究代表者 |
横山 仁 弘前大学, 農学生命科学部, 准教授 (90455816)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 発生・分化 / 細胞・組織 / 動物 / 器官再生 / 発現制御 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では I.形態再生に関わる遺伝子群の特定 II.再生芽細胞の形成に関わる遺伝子群の特定 III.器官再生を制御する遺伝子群の機能の実証 の３つの研究をツメガエルを対象にして行う。項目「I」「II」においてRNA-seqによってそれぞれ目的とする遺伝子群を特定したうえで、項目「III」（実施は次年度以降）ではIR-LEGOなどの局所的な遺伝子発現の操作技術を駆使して、特定した遺伝子群を成体の四肢や皮膚で発現させ、その再生能力を回復させることによって機能を実証する。
I.形態再生に関わる遺伝子群の特定
ネッタイツメガエルの四肢の再生芽を対象にしてRNA-seqに必要な量のtotal RNAを回収するための実験条件を検討した。その上で幼生と成体のそれぞれについて、四肢の切断前と切断後について独立に３つずつのreplicateを取ってtotal RNAを回収した。その上で次世代シークエンサー（NextSeq PE75）によるRNA-seqを実施した。
II.再生芽細胞の形成に関わる遺伝子群の特定
当初の予定ではネッタイツメガエルの皮膚を材料としてRNA-seqを行う予定であったが、連携研究者の内山郁夫氏らとの議論の結果、体サイズが大きくて皮膚創傷実験が行いやすいアフリカツメガエルを材料としてRNA-seqを行っても当初の目的を達成できることが分かったので、アフリカツメガエルで実験を実施することにした。大量のtotal RNAを回収するのに適した皮膚創傷実験の方法を検討し、最適な方法を明らかにした。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
四肢の再生に関して、十分な品質のtotal RNAを回収して予定していたRNA-seqを実施することができた。また皮膚の再生に関しても、創傷の与え方について複数の方法を検討して、最適な方法を明らかにすることができた。以上の点から、本研究はおおむね順調に進展していると判断した。
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| 今後の研究の推進方策 |
四肢再生を対象にして実施したRNA-seqの結果と以前に行ったエピゲノム解析の結果との比較解析については、まだ本格的に実施できていない。一つは、研究代表者本人はこれまでに次世代シークエンサーのデータに対するドライ解析の実施経験があまりないため、比較解析の実施が後回しになりがちな面がある。そのため、これら解析のプロである連携研究者の内山郁夫氏との連絡を密にとり、疑問点を解消していくことを予定している。そのため、ドライ解析に疑問点が生じた場合にはできる限り内山氏の研究室を直接訪問して打ち合わせを行い、その解決を図ることを予定している。
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