研究課題
GISTに見られるc-kit・PDGFRA遺伝子変異のうち、それぞれ全GISTの約10%を占め、かつ分子標的薬イマチニブに初期耐性を示すことの多いc-kit遺伝子の細胞外領域 (exon 9) の重複変異 (Dup-502&503) とPDGFRA遺伝子のキナーゼドメインII (exon 18) の点突然変異 (Asp842Val)、そして比較的頻度が高く、悪性度も高いことから、治療標的としての重要性があると考えられるc-kit遺伝子の傍細胞膜領域 (exon 11) の欠失 (Del-557&558) に対して、特異的に反応するモノクローナル抗体の作製を目指した。c-kit遺伝子のDup-502&503を持つKITに特異的に反応するモノクローナル抗体およびPDGFRA遺伝子のAsp842Valを持つPDGFRAに特異的に反応するモノクローナル抗体の作製についてはよいクローンが得られなかったことから、ペプチド合成部位の変更などにより、再度の作製を試みる。c-kit遺伝子のDel-557&558を持つKITに対するモノクローナル抗体に関しては、現在、マウスミエローマ細胞と変異を有するペプチドで免疫後のマウス脾・リンパ節のリンパ球の融合から、クルードな状態ではあるが抗体価の高い分画がELISA法で確認されており、今後Del-557&558変異を持つKITに特異的に反応する融合細胞をクローン化することを試みる。GISTに関する並行した研究として、NF1患者におけるGISTに関する臨床病理学的研究やGISTの二次耐性患者の末梢血を用いてc-kit遺伝子の二次耐性変異の検出が可能であること、イマチニブ二次耐性GISTの遺伝子発現解析結果、十二指腸GISTの臨床病理学的特徴、等を報告した。
3: やや遅れている
当初、平成28年度中にc-kit遺伝子の細胞外領域 (exon 9) のコドン502番とコドン503番の重複変異 (Dup-502&503) を持つKITに特異的なモノクローナル抗体を得る予定であったが、ペプチド鎖を合成してマウスを免疫し、抗体価の上昇までは確認され、脾細胞 (リンパ球) とマウスの抗体非産生性のミエローマ細胞とを細胞融合させるところまでは達成されたものの、そのクローニングの段階でDup-502&503変異を持つKITと特異的に反応するモノクローナル抗体を産生する細胞のクローン化には至らなかった。一方、c-kit遺伝子の傍細胞膜領域 (exon 11) に見られる欠失 (Del-557&558) を持つKITに対するモノクローナル抗体作製を並行して行っていたが、現在、マウスミエローマ細胞と変異を有するペプチドで免疫後のマウス脾・リンパ節のリンパ球の融合から、クルードな状態ではあるが抗体価の高い分画がELISA法で確認されている。
c-kit遺伝子の exon 9 のコドン502番とコドン503番の重複変異 (Dup-502&503) を持つKITに特異的なモノクローナル抗体の作製に関しては、ペプチド合成部位の変更などにより、再度の作製を試みる予定である。c-kit遺伝子のexon 11に見られる欠失 (Del-557&558) を持つKITに対するモノクローナル抗体作製に関しては、今後Del-557&558変異に特異的に反応する融合細胞をクローン化することを試みる。
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すべて 雑誌論文 (5件) (うち国際共著 1件、 査読あり 5件、 オープンアクセス 2件) 学会発表 (2件) (うち招待講演 2件)
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