再生不良性貧血におけるクローン性造血機序の解明

2018 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16H05335
• 研究機関: 金沢大学
• 研究代表者: 中尾 眞二 金沢大学, 医学系, 教授 (70217660)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: 再生不良性貧血 / HLA / 細胞傷害性T細胞 / HLAクラスIアレル欠失

研究実績の概要

１．再生不良性貧血（再不貧）患者造血幹細胞における新たなHLA欠失メカニズムの同定
再不貧患者では、細胞傷害性T細胞（cytotoxic T lymphocyte: CTL）からの攻撃を免れたHLAクラスIアレル欠失（HLA[-]）造血幹前駆細胞（hematopoietic stem progenitor cells: HSPCs）由来の白血球が約25％に検出される。第6染色体短腕のloss of heterozygosity (6pLOH)や、個々のHLA遺伝子における機能喪失型変異以外のHLA欠失機序として。本研究では、異なるHLAクラスIアレル間で共通するエクソン1領域のナンセンス変異（X変異）が、6pLOH陽性例の65％、6pLOH陰性例の21%に検出されることを明らかにした。このX変異を0.07%まで検出できるdroplet digital PCR（ddPCR）アッセイを確立し、293例の再不貧患者を調べたところ、33%にX変異が検出された。このddPCR法を用いれば、患者のHLAが不明であっても24時間以内に、HLA(-)血球の原因となるX変異を検出することができる。現在特許申請を準備している。
２．HLA非欠失血球HSPCsにおけるCTLからの回避メカニズムの同定
特定のHLAアレルを欠失した細胞が顆粒球のほぼ100%を占める再不貧患者においても、HSPCレベルでは、HLA非欠失（HLA[+]）細胞が50%以上を占めている例が存在する。このHLA(+)HSPCは、CTLからの攻撃を回避するための何らかの抵抗性機序を獲得している可能性が高い。これを明らかにするため、HLA(-)血球陽性患者をスクリーニングし、末梢血HSPCがHLA(+)細胞とHLA(-)細胞とのモザイク状態にある患者を9症例同定した。純化したHSPCのRNAシーケンシングを現在準備中である。

現在までの達成度 (段落)

平成30年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

平成30年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Escape hematopoiesis by HLA-B5401-lacking hematopoietic stem progenitor cells in men with acquired aplastic anemia (2019)
  • 著者名/発表者名: Mahmoud I. Elbadry, Hiroki Mizumaki, Kohei Hosokawa, J. Luis Espinoza, Noriharu Nakagawa, Kazuhisa Chonabayashi, Yoshinori Yoshida, Takamasa Katagiri, Kazuyoshi Hosomichi, Yoshitaka Zaimoku, Tatsuya Imi, Mai Anh Thi Nguyen, Youichi Fujii, Atsushi Tajima, Seishi Ogawa, Katsuto Takenaka, Koichi Akashi, Shinji Nakao
  • 雑誌名: Haematologica 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.3324/haematol.2018.210856.
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [学会発表] Loss-of-Function Mutations in HLA-Class I Alleles in Acquire Aplastic Anemia: Evidence for the Involvement of Limited Class I Alleles in the Auto-Antigen Presentation of Aplastic Anemia (2018)
  • 著者名/発表者名: Mizumaki H, Hosomich K, Tanabe M, Yoroidaka T, Imi T, Zaimoku Y, Hosokawa K, Katagiri T, Takamatsu H, Ozawa T, Azuma F, Kishi H, Tajima A, Nakao S
  • 学会等名: The 60st American Society of Hematology Annual Meeting and Exposition
  • 国際学会
• [学会発表] The Depletion of TGF-β Co-Receptor CD109 Induces Erythroid Differentiation of TF-1 Cells: A Model of Preferential Commitment of /Piga/-Mutated Hematopoietic Stem Cells in Immune-Mediated Bone Marrow Failure (2018)
  • 著者名/発表者名: Tanabe M, Nakagawa N, Hosokawa K, Espinoza L, Maruyama K, Katagiri T, Yamazaki H, Nakao S
  • 学会等名: The 60st American Society of Hematology Annual Meeting and Exposition
  • 国際学会