関節リウマチ特異的な免疫複合体のエピトープの精密特定と複合体形成制御薬の基礎開発

2017 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16H05344
• 研究機関: 長崎大学
• 研究代表者: 大山 要 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(薬学系), 准教授 (50437860)
• 研究分担者: 稲嶺 達夫 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(薬学系), 助教 (00549628) ; 一瀬 邦弘 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 講師 (60437895) ; 岸川 直哉 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(薬学系), 准教授 (90336181)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: 免疫複合体

研究実績の概要

昨年度の検討結果から、免疫複合体抗原をより選択的・高感度に検出するために免疫複合体から抗原のみを選択的に溶出させる必要があると考えた。そこで、従来法 (A) に加え、過去の文献 (Yarmush, Biotechnol Prog 1992; Moorhouse, J Pharm Biomed Anal 1997) を参考に pHの低い溶出液を用いて抗原-抗体を解離させ抗原を溶出する方法 (B)と、パパインで抗体のヒンジ部分を切断し、Fabと抗原を溶出する方法（C）を比較検討した。なお、ここでの検討には免疫複合体モデル (Myoglobin, 抗 Myoglobin 抗体) とヒト血清を用いた。
免疫複合体モデル の結果からPapain 溶出法 (C) が最も選択的に免疫複合体抗原を溶出することがわかった。さらに、ヒト血清での検討においても、Papain 溶出法 (C) が多量に含まれるタンパク質の影響を受けることなく、最も選択的に免疫複合体抗原を溶出し、これまで検出できなかった微量な免疫複合体抗原も検出できることが分かった。この検討結果をもとに、自己免疫疾患であるシェーグレン症候群の唾液検体の解析を行ったところ、既知の免疫複合体抗原に加え、未知の免疫複合体抗原を検出することに成功した。今回の改良で、唾液のようにタンパク量が非常に少ない検体からでも免疫複合体抗原を検出できることが示された。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

免疫複合体のエピトープ領域を消化・除去するための基礎検討がまだ終了しておらず、その後の患者自己抗体からのエピトープ配列の正確な絞込みの検討に進めていない。

今後の研究の推進方策

平成29年度に抗原選択的な同定・検出法を確立することができた。これは上記の基礎検討やエピトープ配列の絞込みを進めるうえで、重要な知見である。この方法を駆使して、平成30年度は効率的に研究を進める。

研究成果

• [雑誌論文] Immuno complexome analysis of antigens in circulating immune complexes from patients with acute cellular rejection after living donor liver transplantation. (2018)
  • 著者名/発表者名: N. Aibara, K. Ohyama, M. Hidaka, N. Kishikawa, Y. Miyata, M. Takatsuki, S. Eguchi, N. Kuroda
  • 雑誌名: Transplant Immunology 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1016/j.trim.2018.02.011
  • 査読あり
• [雑誌論文] Novel anti-suprabasin antibodies may contribute to the pathogenesis of neuropsychiatric systemic lupus erythematosus. (2018)
  • 著者名/発表者名: K. Ichinose, K. Ohyama, K. Furukawa, O. Higuchi, A. Mukaino, K. Satoh, S. Nakane, T. Shimizu, M. Umeda, S. Fukui, A. Nishino, H. Nakajima, T. Koga, S. Kawashiri, N. Iwamoto, M. Tamai, H. Nakamura, T. Origuchi, M. Yoshida, N. Kuroda, A. Kawakami
  • 雑誌名: Clinical Immunology 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1016/j.clim.2017.11.006
  • 査読あり
• [学会発表] 強みを生かせばできる！基礎-臨床双方向の研究展開 (2018)
  • 著者名/発表者名: 大山 要
  • 学会等名: 日本薬学会第138年会
  • 招待講演
• [学会発表] イムノコンプレキソーム解析法における免疫複合体抗原選択的な溶出法の検討 (2018)
  • 著者名/発表者名: 相原希美，蒲原千裕，Anil Chauhan，岸川直哉，中嶋幹郎，黒田直敬，大山 要
  • 学会等名: 日本薬学会第138年会