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2017 年度 実績報告書

生殖とエクソソーム:卵成熟、受精、胚発生、着床におけるクロストーク機構の解明

研究課題

研究課題/領域番号 16H05475
研究機関慶應義塾大学

研究代表者

浜谷 敏生  慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 講師 (60265882)

研究分担者 宮戸 健二  国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 細胞医療研究部, 室長 (60324844)
阿久津 英憲  国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 生殖医療研究部, 部長 (50347225)
山田 満稔  慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 助教 (40383864)
研究期間 (年度) 2016-04-01 – 2020-03-31
キーワードエクソソーム / miRNA / 卵胞 / 胚盤胞 / 子宮内膜 / 培養液
研究実績の概要

顕微授精後に1個の受精卵をsingle step mediumの30-ul dropに入れ、5日間培養液は交換せずに胚盤胞期まで培養して形態良好胚盤胞(Veeck分類3BB以上)が得られた場合に、使用済み培養液を回収し、胚それぞれについて凍結保存した(~25 ul)。胚を入れずに同様に培養したコントロール培養液も凍結保存した。RNA-seqによりmiRNA網羅的解析を行った結果、胚を入れた培養液では、胚を入れないコントロール培養液に比べて多数のmiRNAの濃度が有意に高かった。このことから、胚から放出されるmiRNAが多数存在することが明らかとなった(e.g. has-let-7b, 7c, 7f, 7i, has-mir-181a, 181b, 182, 192, 21, 202, 28, 302a, 30e, 371a, 373, 423, 509, 512, 873, 92a, 92b)。さらに、顕微授精後に胚盤胞培養した胚の使用済み培養液を胚それぞれについて凍結保存した。形態良好胚を胚移植し妊娠に至った胚が由来する培養液群と非妊娠胚の培養液群との間で、miRNAプロファイルを比較したところ、それぞれの群で特異的に発現するmiRNAが抽出された。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

倫理委員会の承認、臨床サンプルの収集と保存方法の確定、さらに臨床経過を追跡しその後の妊娠の有無の検討などに時間を要したため

今後の研究の推進方策

採卵時に回収される卵胞吸引液を卵胞それぞれについて凍結保存し、胚移植後の妊娠の有無を追跡している。卵胞液中のエクソソーム内のmiRNA網羅的解析およびタンパク質プロファイリングは2018年度には開始する予定である。
着床期のヒト子宮内腔洗浄液については、採取方法に関して検討を加えた。サイトコレクトでは十分な子宮内腔液を採取することが難しかったため、気管吸引チューブを子宮腔に挿入し、生理食塩水5mlで洗浄、回収した。反復着床不全症例に対して、子宮内腔液を凍結保存するとともに、その後の臨床経過を追跡している。子宮内腔液の採取後、無治療で胚移植後に臨床妊娠に至った群、子宮内腔液の採取あるいは子宮鏡にて慢性子宮内膜炎が疑われ、抗生剤・抗炎症薬が投与された群、さらに、治療後に再び子宮内腔液が採取されたが、胚移植後に臨床妊娠に至った群に分類している。

  • 研究成果

    (5件)

すべて 2018 2017

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 2件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (2件)

  • [雑誌論文] Ubiquitin-activating enzyme E1 inhibitor PYR-41 retards sperm enlargement after fusion to the egg.2018

    • 著者名/発表者名
      Yoshida K, Kang W, Nakamura A, Kawano N, Hanai M, Miyado M, Miyamoto Y, Iwai M, Hamatani T, Saito H, Miyado K, Umezawa A
    • 雑誌名

      Reprod Toxicol.

      巻: 76 ページ: 71-77

    • DOI

      10.1016/j.reprotox.2018.01.001.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Clinical efficacy of a combination of Percoll continuous density gradient and swim-up techniques for semen processing in HIV-1 serodiscordant couples.2017

    • 著者名/発表者名
      Inoue O, Kuji N, Ito H, Yamada M, Hamatani T, Oyadomari A, Kato S, Hanabusa H, Isaka K, Tanaka M.
    • 雑誌名

      Asian J Androl

      巻: 19(2) ページ: 208-213

    • DOI

      10.4103/1008-682X.173442.

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] 不妊治療における慢性炎症と着床不全2017

    • 著者名/発表者名
      吉井 紀子, 浜谷 敏生.産婦人科領域と炎症(青木大輔編著)
    • 雑誌名

      別冊Bio Clinica:慢性炎症と疾患

      巻: 6(4) ページ: 78-83

  • [学会発表] 胚性遺伝子KzpiはDifferentially methylated regionsにおけるメチル化を保護して胚発生に寄与する.2017

    • 著者名/発表者名
      上條 慎太郎, 浜谷 敏生, 山田 満稔, 小川 誠司, 阿久津 英憲, 秦 健一郎, 田中 守, 青木 大輔
    • 学会等名
      第69回日本産科婦人科学会学術講演会
  • [学会発表] 卵子加齢機構の探索と臨床への示唆.シンポジウム「卵子の成熟と老化 -最新知見-2017

    • 著者名/発表者名
      浜谷敏生
    • 学会等名
      第35回日本受精着床学会総会・学術講演会

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公開日: 2018-12-17  

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