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2017 年度 実績報告書

微小管分子モーターの力学特性と有糸分裂メカニズム

研究課題

研究課題/領域番号 16H06166
研究機関国立遺伝学研究所

研究代表者

島本 勇太  国立遺伝学研究所, 新分野創造センター, 准教授 (80409656)

研究期間 (年度) 2016-04-01 – 2019-03-31
キーワード有糸分裂 / 紡錘体 / キネシン / 分子モーター / 力計測 / アフリカツメガエル
研究実績の概要

真核生物の細胞分裂時における染色体の均等分配は、紡錘体装置の適切な集合と機能に依存する。紡錘体は分裂期の細胞内でメカニカルな力を発生しまた受容しながらその構造を安定に維持して機能するが、そのしくみには不明な点が多い。特に、in vitro, in vivoレベルでは多くの知見が得られているが、両者の間には未だ大きなギャップが存在する。これを解決するため、紡錘体内で微小管が運動する様子をin situで観察しながら、力の効果を定量的に解析することができるアッセイ系を構築した。紡錘体を形成する微小管は非常に密に存在し、通常の蛍光観察で一本の運動を解像することは非常に困難である。またその動態は非常にダイナミックであるため、電子顕微鏡などの固定観察法は使えない。そこで、スペックル観察法と呼ばれる蛍光イメージング技術とマイクロニードルを基礎とした力計測・操作手法を組み合わせることによりこれを解決した。さらにcell-freeで細胞周期現象が再現できるアフリカツメガエル卵抽出液を用いることで、紡錘体に対する直接、定量的な力の計測と、蛍光標識チューブリンや阻害薬剤等の滴定添加を可能とした。その結果、紡錘体微小管は赤道面や極などの局所環境の違いに応じて力に対する運動特性が異なることが明らかとなった。ここで得られた結果はこれまでの主要な紡錘体モデルとは異なるものであり、イメージング計測のみでは捉えることのできなかった新しいメカニズムの存在を示唆するものである。

これとは独立に、ツメガエル卵抽出液の紡錘体形成活性を新鮮に調製した試料と同程度の活性で凍結保存する方法を開発した。これにより、調製や個体差に起因するデータのばらつきを低減し、紡錘体の硬さと極間距離の間に正の相関があることを発見した。

またここで開発した技術を用いて、共同研究を中心にERや微小管アスターなどの細胞内構造が持つ力学特性や集合活性を明らかにした。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

紡錘体の力計測実験について、申請時に設定したマイルストーンを達成し、微小管運動の詳細について明らかにすることができたたため。また、当初予定していなかったツメガエル卵に関する新たなアッセイ法を開発し、論文成果発表に至ったため。この予想外の進展に注力したことに伴い、並行して進めていた再構成実験についてはアッセイ系の構築と実験条件の最適化に留まった。

今後の研究の推進方策

紡錘体微小管の運動と局所力学特性の解析については、当該年度に得られた実験結果に基づいて新たなモデルを構築し、さらに分子摂動実験を加えて、論文成果発表、プロジェクトの完結を目指す。また新たに開発した抽出液抽出法について、研究室内での使用にとどまらず、他研究機関・研究者に分与する体制を整えることでこのモデル系を使った研究の推進に広く貢献することを目指す。再構成実験については共同研究先との交流をより活発に行いながらアッセイ系を確立し、微小管分子モーターが示す創発的な特性についてin vitroレベルでの知見を得ることを目指す。

  • 研究成果

    (9件)

すべて 2018 2017 その他

すべて 国際共同研究 (1件) 雑誌論文 (3件) (うち国際共著 2件、 査読あり 3件、 オープンアクセス 2件) 学会発表 (4件) (うち国際学会 2件、 招待講演 2件) 産業財産権 (1件) (うち外国 1件)

  • [国際共同研究] Academia Sinica(台湾)

    • 国名
      その他の国・地域
    • 外国機関名
      Academia Sinica
  • [雑誌論文] Endoplasmic-reticulum-mediated microtubule alignment governs cytoplasmic streaming2017

    • 著者名/発表者名
      Kimura Kenji、Mamane Alexandre、Sasaki Tohru、Sato Kohta、Takagi Jun、Niwayama Ritsuya、Hufnagel Lars、Shimamoto Yuta、Joanny Jean-Fran?ois、Uchida Seiichi、Kimura Akatsuki
    • 雑誌名

      Nature Cell Biology

      巻: 19 ページ: 399~406

    • DOI

      10.1038/ncb3490

    • 査読あり / 国際共著
  • [雑誌論文] High-quality frozen extracts of Xenopus laevis eggs reveal size-dependent control of metaphase spindle micromechanics2017

    • 著者名/発表者名
      Takagi Jun、Shimamoto Yuta
    • 雑誌名

      Molecular Biology of the Cell

      巻: 28 ページ: 2170~2177

    • DOI

      10.1091/mbc.E17-03-0174

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Regulation of mitotic spindle assembly factor NuMA by Importin-β2017

    • 著者名/発表者名
      Chang Chih-Chia、Huang Tzu-Lun、Shimamoto Yuta、Tsai Su-Yi、Hsia Kuo-Chiang
    • 雑誌名

      The Journal of Cell Biology

      巻: 216 ページ: 3453~3462

    • DOI

      10.1083/jcb.201705168

    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [学会発表] Micromanipulating the spindle to study chromosome segregation in anaphase2018

    • 著者名/発表者名
      Jun Takagi, Takeshi Itabashi, Shin’ichi Ishiwata, Yuta Shimamoto
    • 学会等名
      Biophysical Society 62nd Annual Meeting
    • 国際学会
  • [学会発表] 有糸分裂モーターキネシン5の協同的な力発生と紡錘体サイズ制御のメカニズム2017

    • 著者名/発表者名
      島本勇太
    • 学会等名
      日本細胞生物学会
    • 招待講演
  • [学会発表] 有糸分裂紡錘体の集合と機能メカニクス2017

    • 著者名/発表者名
      島本勇太
    • 学会等名
      細胞を創る研究会
    • 招待講演
  • [学会発表] Preparing frozen Xenopus egg extracts for the study of spindle assembly mechanisms2017

    • 著者名/発表者名
      Jun Takagi, Yuta Shimamoto
    • 学会等名
      American Society for Cell Biology 2017 Annual Meeting
    • 国際学会
  • [産業財産権] アフリカツメガエル卵抽出液の冷凍保存方法及び冷凍保存用キット、アフリカツメガエル卵濃縮抽出液、並びに細胞周期の分析方法2018

    • 発明者名
      島本勇太、高木順
    • 権利者名
      島本勇太、高木順
    • 産業財産権種類
      特許
    • 産業財産権番号
      PC25049
    • 外国

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公開日: 2018-12-17   更新日: 2022-08-05  

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