ゲノムに局在するユビキチン様修飾分子Ufm1による生活習慣病防御機構の解明

2019 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16H06221
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 渡部 昌 北海道大学, 医学研究院, 講師 (10632424)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2020-03-31
• キーワード: UFM1

研究実績の概要

①前年までに同定していたUFM1化タンパク質Xは、UFM1化を受けるともにUFM1分子そのものと非共有結合的に相互作用していることを確認した。
②質量分析にてXのUFM1化部位の同定を試みたものの、UFM1化の証拠となるような、Xのリジン残基にValGlyがイソペプチド結合したペプチドを検出することができなかった。
③上記を受けて、UFM1化部位の絞り込みを行うためにXの欠失変異体を作製してUFM1化アッセイを行ったところ、少なくともXのアミノ末端側のドメインにUFM1化サイトが存在することを見出した。
④UFM1化タンパク質Xは脂質メディエーターの代謝酵素であったため、ヒト好塩基球細胞株KU812FでUFM1をノックダウンし、ELISA法を用いて代謝産物量の測定を行った。すると、UFM1のノックダウンにより代謝産物量の増加を認めた。UFM1はおそらくXを介して代謝産物の生成に対し抑制的に機能していることが考えられた。
⑤UFM1化タンパク質XがUFM1化経路を制御する可能性についての検証：UFM1化経路を構成する酵素は、自己UFM1化を受けることが知られている。同定したUFM1化タンパク質XもUFM1化経路を制御する可能性があると考え、細胞内でXをノックダウンし、UFM1抗体によるウエスタンブロット解析により、細胞内UFM1化タンパク質の変化を検討した。しかし、Xのノックダウンにより細胞内UFM1化タンパク質に大きな変化を認めることはなかったため、XはUFM1化経路本体には影響を与えていないものと考えられた。

現在までの達成度 (段落)

令和元年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

令和元年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] The role of Mediator and Little Elongation Complex in transcription termination (2020)
  • 著者名/発表者名: Takahashi H, Ranjan A, Chen S, Suzuki H, Shibata M, Hirose T, Hirose H, Sasaki K, Abe R, Chen K, He Y, Zhang Y, Takigawa I, Tsukiyama T, Watanabe M, Fujii S, Iida M, Yamamoto J, Yamaguchi Y, Suzuki Y, Matsumoto M, Nakayama KI, Washburn MP, Saraf A, Florens L, Sato S, TomomoriSato C, Conaway RC, Conaway JW, Hatakeyama S
  • 雑誌名: Nature Communications 巻: 11 ページ: 1063
  • DOI: 10.1038/s41467-020-14849-1
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [学会発表] 自然免疫シグナルに関わるユビキチンリガーゼ群の網羅的な基質同定と解析 (2019)
  • 著者名/発表者名: 渡部 昌
  • 学会等名: 第92回日本生化学会大会
  • 招待講演