研究課題
1.慢性リンパ浮腫モデルを作製するために、雌性・雄性マウスを用い、リンパ節とリンパ管の切除部位を検討した。リンパ管は切除しても再生されてしまうため、リンパ節の切除が適切であることがわかった。マウスの下肢に浮腫を作製するため、下肢の解剖を実施したところ、新たなリンパの経路を発見した。リンパ管の経路に性差はなかった。2.マウス下肢リンパ浮腫モデルを作製するために、リンパ節切除の部位や組み合わせを変え、モデルの作製を実施した。鼠径リンパ節の切除だけでは、長期間飼育してもリンパはうっ滞しないこと、鼠径周囲のリンパ管は再生することがわかった。本実験では、マウスの下肢を走行するリンパ管ルートを全て遮断したリンパ浮腫モデルが最も浮腫が持続した。現在、組織学的観察を実施し、浮腫性変化が観察されるか検討中である。3.マウスの集合リンパ管を観察するために、固定方法や包埋方法の条件を検討し、プロトコルが確立できた。集合リンパ管は非常に脆く、パラフィン切片では形態を保持できず、観察できないことが分かった。凍結切片にて試料を薄切し、リンパ管内皮細胞のマーカーであるPodoplanin、LYVE-1の染色を実施したが、非特異的反応が多く、プロトコルを調整しPodoplaninをマーカーとして採用することとした。今後は、集合リンパ管の観察のため、Podoplaninとα-SMAの抗体を用いて二重染色を実施し、リンパ管切除部周囲の新生リンパ管の評価を実施する予定である。
2: おおむね順調に進展している
慢性浮腫モデルの作製と集合リンパ管の組織切片作製に予想以上に時間を要したが、モデルの見通しが立ち、組織観察手法はプロトコル確立まで達成した。
作製した浮腫モデルの組織所見によるが、浮腫組織やリンパ管再生部位で起きている現象を形態学的に明らかにする。それらの組織変化に関連する細胞やサイトカイン等を探り、リンパ管内皮細胞の培養系を確立し、共培養を行い、リンパ浮腫の要因を検討する。
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