| 研究課題/領域番号 |
16K00939
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| 研究機関 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 |
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研究代表者 |
一法師 克成 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構, 食品研究部門 食品健康機能研究領域, 上級研究員 (30355606)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | ターゲット・プロテオミクス / モモ / アレルゲン / 定量 / LC/MS/MS / Pru p 1 / Pru p 3 / 安定同位体標識内部標準ペプチド |
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| 研究実績の概要 |
ターゲット・プロテオミクスによるモモアレルゲンタンパク質Pru p 1、Pru p 2、Pru p 3およびPru p 4の一斉定量法を開発するため、以下の研究を行った。
UniProtKBに登録されているPru p 1～4のアミノ酸配列情報を用いて、in silicoでのトリプシン消化を行い、安定同位体標識内部標準ペプチド（AQUAペプチド）に適した配列を持つ、Pru p 1～4に対応した4つのペプチドを選定し、それらを合成した。LC-MS/MSの質量分析部へAQUAペプチドをインフージョンし、フルスキャン測定およびプロダクトイオン測定を行い、これらペプチドのMRMトランジションを決定した。次に、AQUAペプチドおよびモモタンパク質トリプシン消化物を用いて、オクタデシルシリル（C18）基を持った逆相クロマトグラフィーや親水性相互作用クロマトグラフィー（ZIC-HILIC）の分離モード、水/アセトニトリルの比率等の移動相などの液体クロマトグラフィー（LC）条件を検討し、Pru p 1およびPru p 3の分析に適したLC条件を決定した。Pru p 2およびPru p 4については、トリプシン消化により生成する、AQUAペプチドに対応した内生ペプチドを検出できなかった。
Pru p 1およびPru p 3の定量法について、マトリックスへ添加したAQUAペプチドの濃度系列の測定による直線性の確認、モモ生鮮品を対象に日内変動と日間変動の調査による再現性の確認を行い、定量法の妥当性を評価した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
Pru p 2およびPru p 4については、トリプシン消化により生成する、AQUAペプチドに対応した内生ペプチドを検出できず、定量法を開発することができなかったため。モモのPru p 2およびPru p 4含量が、本分析法の検出下限値以下であることなどが、検出できない理由の一つと考えられる。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成29年度は、平成28年度と同様の研究手法を用いて、オウトウのアレルゲンタンパク質Pru av 1、Pru av 2、Pru av 3およびPru av 4の一斉定量法を開発する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
実験補助員の雇用が遅れ、人件費が見込額より少なくなったことや有機溶媒の使用量が少ない定量法を開発したため、有機溶媒の費用が少なくなったことなど。
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| 次年度使用額の使用計画 |
試薬、分析カラムやバイアル等の物品購入に使用する。
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