| 研究課題/領域番号 |
16K07067
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| 研究機関 | 順天堂大学 |
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研究代表者 |
宮元 伸和 順天堂大学, 医学部, 准教授 (10365661)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | BDNF / 慢性低潅流モデル / 脳血管性認知症 / oligodendrogenesis |
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| 研究実績の概要 |
動物モデルにおいては、両側総頸動脈狭窄モデルの再現性が得られるかを見るため、コントロール群を作成し、虚血作成前、虚血作成後7日、14日、28日にて免疫組織化学的に白質の粗造化、オリゴデンドロサイト系の活性化、BrdUを用いた新生細胞数を確認した。10-12週齢C57BL6マウスを用いることにより、脳梗塞とはならず、白質の塑像化が再現性を持って得られ、さらにはオリゴデンドロサイトも虚血後一過性に上昇し、その後低下することが判明した。Ki67、BrdUを用いた新生細胞数においては、Ki67において14日をピークに細胞数の上昇が得られており、celltypingではオリゴデンドロサイト前駆前駆細胞(OPC)であった。BrdUを投与し2週間後の評価では一部成熟オリゴデンドロサイト（OLG）となるが、手術群ではOPCの割合が多かった。BDNFは14日まで経時的に低下してきており、28日では14日のレベルをkeepしていた。脳血流評価においては既報告通り、手術直後は手術前60％程度まで低下するものの、手術後28日では80-90%の低下になっていた。
初代培養系においては、既報告にあるような方法でオリゴデンドロサイト、アストロサイト初代培養系が機能するかを確認。そのうえでCoCl2を投与し慢性虚血変化が得られるかを確認した。そのうえでBDNFを投与した。CoCl2によりOPCがOLGに細胞死に至らない濃度においても成熟が抑えられ、実験の再現性を得られている。また、このmediumにBNDFを添加したところ、BDNFはCoCl2の成熟抑制効果を抑制し、オリゴデンドロサイト系の成熟、髄鞘の形成を促した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
実験開始にあたり、書類申請に遅れが出現したため、実験開始が遅れていた。しかし、実験開始後は当初の予定通り進行している。遺伝子改変に関してはいまだ申請中であり、今年度中の申請許可を目指していく。
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| 今後の研究の推進方策 |
動物実験においては、まず、osmotic minipumpによる頭蓋内BDNFの実験を先行させ、慢性低潅流において、白質保護効果が得られるか確認していく。そのうえで、遺伝子改変の許可が下りた際には当該実験を進めていく。
初代培養系において、今後はアストロサイト、マイクログリア内の栄養因子を測定し、BDNFとのかかわりを検討していく。また各種薬剤を用いて阻害実験をおこない、シグナル伝達系の確認を行い、さらにはmedium transfer methodを用い、直接的な影響を測定する方針である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
細胞染色のための抗体を購入したかったが、残金よりも高額のため購入できなかった。また、追加の動物実験に使用するためのコイルの購入も考慮したが、残金よりも高額であったため購入できなかった。
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| 次年度使用額の使用計画 |
次年度に当該抗体、コイルを購入することとした。
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