| 研究課題/領域番号 |
16K07073
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| 研究機関 | 近畿大学 |
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研究代表者 |
宮田 信吾 近畿大学, 東洋医学研究所, 教授 (70403194)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | オリゴデンドロサイト / PI3Kシグナル / タンパクメチル化 / 慢性ストレス |
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| 研究実績の概要 |
本研究は、オリゴデンドロサイト特異的かつ慢性ストレス特異的なリン酸化シグナルに対する制御因子としてのアルギニンメチル化の新規役割を解明し、オリゴデンドロサイト機能維持によるうつ病性疾患や不安障害の治療・予防への応用に展開するための研究基盤を確立することが目的である。
申請者はこれまでに、慢性ストレス暴露によるうつ病発症機構として、脳白質におけるオリゴデンドロサイト形態異常と接着因子発現変化の関連性、オリゴデンドロサイトの構造変化だけでなくその活性レベルの変化に関わる受容体の同定とヒトうつ病患者における脳白質線維束の走行異常等に関する研究成果を上げてきた。更にオリゴデンドロサイトにおいて慢性ストレス特異的なリン酸化経路を同定している。
平成28年度は、慢性ストレス暴露における神経細胞およびグリア細胞でのアルギニンメチル化レベルについて、SYM11(symmetric-dimethy arginine)抗体およびASYM24(asymmetric-dimethy arginine)抗体を用いてWestern blotting法などにより比較検討すると共に培養細胞やオリゴデンドロサイトのDEX刺激によるPI3Kシグナル活性化と変化するPRMTのサブタイプの同定を行った。その結果、PI3KシグナルへPRMT1の関与の可能性が示唆されると共にSYM11抗体を用いた検討では各細胞に変化は観察されず、ASYM24抗体を用いた検討でオリゴデンドロサイトや神経細胞等の一部でアルギニンメチル化レベルの変化が観察された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
平成28年度は、オリゴデンドロサイトで慢性ストレスにより変化するPI3Kリン酸化と関連するアルギニンメチル化レベルの変化に関与するPRMTサブタイプの同定まで行うことが出来た。
さらに、平成29年度からの検討を予定しているMALDI-TOF-massまたはLC-MS/MSによるオリゴデンドロサイトでの慢性ストレス時におけるPRMT1との相互作用が変化する因子の同定、に関する準備も順調である。
これらは、初年度の当初計画にほぼ沿った内容としての成果である。
SYM11抗体およびASYM24抗体によるsymmetric-およびasymmetric-なジメチル化の検出感度が当初の予想より良くないので、他の抗体としてSDMA抗体、ADMA抗体について十分な検出感度であるか検討を進めている。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成29年度は、これまでの研究成果を元に更に詳細な検討に移行する。まずは、オリゴデンドロサイトにおける慢性ストレス応答に関与するPRMT1相互作用因子の同定を行い、その機能解析として、PRMT発現レベルやPI3Kシグナル活性化との関連、さらにはRNA結合タンパクなどのメチル化レベルとの関連を検討する予定である。
さらに、オリゴデンドロサイトの機能を評価する上で重要な、髄鞘化について神経ーオリゴデンドロサイト共培養系の構築の準備を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
PRMTの基質候補因子を検出する抗体の一部について、予定していた購入を本年度行わなかったため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
基質の可能性が見出された因子を特異的に検出できる抗体の経費として使用する予定である。
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