| 研究課題/領域番号 |
16K07265
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| 研究機関 | 富山大学 |
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研究代表者 |
帯田 孝之 富山大学, 大学院医学薬学研究部(薬学), 准教授 (30578696)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 基本転写因子 / Ｘ線結晶構造解析 |
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| 研究実績の概要 |
遺伝子の発現や制御は、細胞の分化や恒常性の維持など生命現象の根幹をなす重要なステップであり、その転写制御にRNAポリメラーゼや多くの転写調節因子が関わっている。その中で基本転写因子TFIIEは、TFIIF等と共同し、さらにTFIIHを誘導することで、RNAポリメラーゼIIを中心とした転写開始複合体の形成に必須の役割を果たしている。本研究では、TFIIEを軸とした基本転写因子群の相互作用ネットワークを、構造生物学的手法やITC等の物理化学的手法を用いて明らかにすることで、主にRNAポリメラーゼIIが関与する転写制御メカニズムを明瞭に説明することを目的としている。
申請者らはこれまでに、ヒト基本転写因子群とその古細菌(Sulfolobus属)のオルソログについて数十を超える発現系の作成、およびタンパク質の精製を行った。続いてBiacoreやITCを用いた相互作用解析を行い、ヒトTFIIEサブユニット間において解離定数約0.2 microMの結合力で結合することを明らかにした。様々な長さのタンパク質を用いて相互作用解析することで、それぞれのサブユニットの結合境界を同定することに成功した。さらに、ヒトTFIIE複合体の結晶化を行い、放射光施設SPring8で良好な反射データ（約2オングストローム）を得ることに成功した。得られたデータを用いてSAD法によって位相を決定し、精密化を行うことでTFIIE複合体の結晶構造を決定した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
申請者らはこれまでに、ヒト基本転写因子群とその古細菌(Sulfolobus属)のオルソログについて数十を超える発現系の作成、およびタンパク質の精製を行った。続いてBiacoreやITCを用いた相互作用解析を行い、ヒトTFIIEサブユニット間において解離定数約0.2 microMの結合力で結合することを明らかにした。さらに、ヒトTFIIE複合体の結晶化を行い、放射光施設SPring8で良好な反射データ（約2オングストローム）を得ることに成功した。得られたデータを用いてSAD法によって位相を決定し、精密化を行うことでTFIIE複合体の結晶構造を決定した。
以上のことから、当初の予定よりも迅速に研究が進行していると考えている。
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| 今後の研究の推進方策 |
申請者らは、今後古細菌(Sulfolobus属)の基本転写因子のオルソログについての解析を進める予定である。既に、古細菌のTFEの結晶を得ており、放射光施設SPring8で良好な反射データを得ている。今後は、更なる分解能の向上と構造決定を目指す予定である。また、相互作用解析についても、結晶構造の結果と併せてすすめる予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
旅費に300,000円を予算としていたが、実際は217,900円であったために、若干の差がでた。また、消耗品費も、予定したよりは若干支出が少なかったため、計154,643円が繰り越されたが、大きな変更はなかったと考えている。
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| 次年度使用額の使用計画 |
昨年度からの繰り越し分は、今年度の消耗品費や旅費に使用する予定であるが、全体としては使用計画に大きな変更はなく実施できると考えている。
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