研究課題
ヒトはウイルスなどの侵入に対してナイーブヘルパーT（Th0）細胞はTh1細胞に分化して、マクロファージや細胞障害性細胞を活性化してウイルスや細胞内抗原の除去を行う。インターロイキン(IL)-27は、Th0細胞からTh1細胞の分化誘導の初期に関わる分子でる。IL-27はfour helix bundle構造をもつp28と２つのfibronectin type ⅢドメインをもつEpstein-Barr virus induced gene 3 (EBI-3)からなる。IL-27の受容体は、特異的なWSX-1とIL-6などと共有されるgp130からなる。本研究の目的は、IL-27/WSX-1/gp130複合体の結晶構造を解明し、Th1細胞分化機構を構造生物学的に解明することである。p28とEBI3はジフルフィド結合を介さない二量体を形成しており、精製中に不安定であったため、リンカーでつないだ一本鎖(s)IL-27のコンストラクトを作成して、動物細胞を用いて発現させた後、精製を行った。WSX-1は大腸菌を用いて発現させた後、精製を行った。精製したsIL-27とWSX-1を混ぜた後、ゲルろ過カラムクロマトグラフィーにより複合体として精製を行った。sIL-27/WSX-1複合体の結晶化条件の検索を行ったが、結晶の形成は確認出来ていない。gp130のドメイン(D)1からD3までを昆虫細胞を用いて発現させた後、精製sIL-27/WSX-1複合体と混合して、sIL-27/WSX-1/gp130複合体として精製を試みたが、gp130(D1-D3)はsIL-27/WSX-1複合体と結合しなかった。そこで、gp130をD1-D4のコンストラクトの調製したところとsIL-27/WSX-1複合体と結合した。精製した三者複合体を用いて結晶化条件の検索を進めているところである。
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SPring-8/SACLA Research Report
巻: 7(1) ページ: 1-4
10.189567/rr.7.1.1
Int. J. Microgravity Sci.
巻: 36(1) ページ: 3601031-3601035
10.15011//jasma.36.360103
