| 研究実績の概要 |
平成29年度研究においては，主に効率よくコイT細胞クローンを得る方法の確立を目指した．すなわち，T細胞増殖因子であるコイ・インターロイキン2（IL-2）の組換えタンパク質を作製し，コイT細胞への増殖効果の有無を測定した．
コイは2種類のIL-2遺伝子（IL-2A，IL-2B）を有しているが，これらの遺伝子をクローニングし，大腸菌によるタンパク発現系を用いてIL-2AおよびIL-2Bの組換えタンパク質（rcIL-2A，rcIL-2B）を作製した．これらコイIL-2の活性は，申請者らがすでに確立しているコイT細胞培養系を用いて調べた．すなわち，コイのリンパ組織でもある腎臓から白血球を分離し，支持細胞（ギンブナ胸腺由来 GTS9細胞株）上に播種すると，ヘルパーT細胞（Th）が選択的に増殖する．これらTh 細胞を回収し48 穴プレートに 1×105個/mL の濃度で播種し，これに rcIL-2AまたはrcIL-2B を終濃度 0, 1, 10, 100 および 1000 ng/mL になるよう加え、30℃、5％CO2存在下で培養した．
rcIL-2AおよびIL-2Bとも，1 ng/mL 以上の濃度でコイ Th 細胞の活発な増殖が認められた．特に，100 ng/mLのrcIL-2 存在下で最大の細胞増殖効果を示した．すなわち，無処理群においては，培養9日目までに培養開始時の細胞数の約1.45 倍の細胞増殖しか認められなかったのに対し，100 ng/mLのrcIL-2存在下においては，当初の細胞数の約 2.7 倍まで細胞増殖が認められた．
コイ IL-2は哺乳類のIL-2と同様にTh細胞へ作用し，増殖を促進することがわかった．
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