| 研究課題/領域番号 |
16K07998
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| 研究機関 | 地方独立行政法人青森県産業技術センター |
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研究代表者 |
佐野 栄宏 地方独立行政法人青森県産業技術センター, 工業部門, 外部資金研究員 (20645577)
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| 研究分担者 |
山本 ゆき 岡山大学, 環境生命科学研究科, 助教 (20645345)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 糖鎖機能 / ウシ発情周期 / 黄体機能 / フコース / シアル酸 |
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| 研究実績の概要 |
これまでに、糖鎖はウシ黄体機能維持に貢献し、糖鎖形成不全が黄体機能を減弱させるという知見を得ており、さらに各発情周期で黄体の糖鎖発現は変化することを発見している。黄体機能の制御には様々な因子の関与することが知られているがその全容は未だ不明であり、黄体の糖鎖機能を標的とした新規黄体機能制御機構を解明することを目的として研究を進めている。
ウシ発情周期各期の糖鎖構造変化及び糖鎖と黄体機能の関連性を検証することを今年度の研究として計画している。具体的には、各発情周期のウシ黄体組織及び細胞をレクチンブロットで解析し、黄体タンパク質全体の糖鎖構造変化を明らかにし、また、糖転移酵素遺伝子発現を解析して糖鎖構造変化の要因を解析することとしている。そこで、黄体の周期を通じた糖転移酵素遺伝子発現および糖鎖発現変化の解析を行った。
ウシ黄体の発情周期を通じた、シアル酸転移酵素の遺伝子発現変化及びフコシル化糖鎖発現変化を検証した結果、シアル酸転移酵素遺伝子発現は退行期黄体で増加することが明らかになり、フコシル化糖鎖も退行期で増加することが明らかになった。また、シアル酸糖鎖発現をレクチンブロットで解析したところ、シアル酸糖鎖が退行期黄体で増加することが明らかになった。さらに、フコシル化糖鎖の黄体細胞生存率に対する影響を調べるために、フコシダーゼ処理した黄体細胞の生存率を検証した結果、フコシダーゼにより黄体細胞の生存率は減少することが明らかになった。今後、この発現変化と黄体機能との関連性を検証する。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
黄体の周期を通じた糖転移酵素遺伝子発現および糖鎖発現変化の解析を行った。
ウシ黄体の発情周期を通じた、シアル酸転移酵素の遺伝子発現変化及びフコシル化糖鎖発現変化を検証した結果、シアル酸転移酵素遺伝子発現は退行期黄体で増加することが明らかになり、フコシル化糖鎖も退行期で増加することが明らかになった。また、シアル酸糖鎖発現をレクチンブロットで解析したところ、シアル酸糖鎖が退行期黄体で増加することが明らかになった。さらに、フコシル化糖鎖の黄体細胞生存率に対する影響を調べるために、フコシダーゼ処理した黄体細胞の生存率を検証した結果、フコシダーゼにより黄体細胞の生存率は減少することが明らかになった。
以上より、概ね順調に進展しているが、細胞に関してはサンプル確保に予想以上の時間を要したため、シアル酸に関する細胞実験は次年度の計画で進める予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
１）シアル酸の増減による黄体細胞の生存率およびプロジェステロン産生に対する影響を検討する。
２）フコシル化の減少による細胞生存率減少のメカニズムを解析する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
（理由）2次元電気泳動装置の購入を予定していたが、内部研究事業の方で購入できたので、当該事業の実験に用いることが出来た。
（使用計画）フコシル化修飾に変化が見られたので、細胞によるフコシル化修飾実験をする必要が生じたため、使用期限のある阻害剤及び促進剤の購入に充当する。また、より実験を促進するための実験補助員の人件費に使用する。
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