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2018 年度 実績報告書

キャピラリーアレー型アフィニティー電気泳動による糖タンパク質糖鎖の迅速分析

研究課題

研究課題/領域番号 16K08209
研究機関近畿大学

研究代表者

鈴木 茂生  近畿大学, 薬学部, 教授 (00154542)

研究期間 (年度) 2016-04-01 – 2019-03-31
キーワードキャピラリー電気泳動 / 糖タンパク質糖鎖解析 / レクチン / エキソグリコシダーゼ / アフィニティー解析 / 網羅的解析
研究実績の概要

キャピラリー電気泳動(CE)は高い分離能を有する反面、分離した成分を分取することは難しい。また研究者が対象とする生体由来の糖タンパク質糖鎖は生体内において、小胞体からゴルジ体に分布する様々な糖鎖合成・分解酵素の協奏的な作用によって合成されるので糖鎖の種類は多い上に濃度の幅が大きいことが知られる。疾病などによる生体の変化に伴って糖鎖生合成が影響を受けることが知られるが、糖鎖分布のわずかな差異として観察されることも少なくない。従ってCEを糖鎖の網羅的な解析に利用する場合は、糖鎖の部分構造を認識して結合するレクチンや糖の加水分解酵素であるエキソグリコシダーゼなどを用いて、分離された各ピークの移動や消失を定量的に解析し、各糖鎖の移動度データベースと比較し、これらを総合的に判断して、各ピーク成分の同定を行うことになる。
最終年度を迎えるに当たり、現在は次の2項目について本法の有効性を検証している。一つは、確認したい糖鎖群の構造の違いに着目し、判定に適した酵素群を逐次(連続)導入した後で分離を行うことにより、糖鎖の配列などを区別できるかを調査している。第二に、培養細胞より調製した膨大な種類の糖鎖混合物について、レクチンやエキソグリコシダーゼの部分導入電気泳動を適用して糖鎖解析が可能かどうかの検証を行っている。特に複合型糖鎖では、分岐鎖の構造が同一であるため、レクチンなどを使って詳細に解析を行っているが、報告されているレクチンの特異性では説明できないデータも得られており、レクチンの専門家への問い合わせを計画している。
アフィニティー専用、すなわちキャピラリーの一部を酵素反応用に37℃前後で保つような電気泳動装置の開発を行っているが、完成できていない。しかし温度調節装置、高圧電源、検出ユニットをすでに入手しているので、今年度中には実現するように努力している。

  • 研究成果

    (12件)

すべて 2019 2018 その他

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件) 学会発表 (8件) (うち国際学会 1件、 招待講演 1件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Simultaneous Determination of Inorganic Anions and Cations in Water and Biological Samples by Capillary Electrophoresis with a Capacitive Coupled Contactless Conductivity Detector Using Capillary Filling Method2019

    • 著者名/発表者名
      YAMAMOTO Sachio、FUJIWARA Haruka、MARUYAMA Katsushi、TANAKA Yoshihide、KINOSHITA Mitsuhiro、SUZUKI Shigeo
    • 雑誌名

      Analytical Sciences

      巻: 35 ページ: 295~300

    • DOI

      10.2116/analsci.18P422

    • 査読あり
  • [雑誌論文] High-performance liquid chromatographic separation of 8-aminopyrene-1,3,6-trisulfonic acid labeled N -glycans using a functional tetrazole hydrophilic interaction liquid chromatography column2018

    • 著者名/発表者名
      Yamamoto Sachio、Kinoshita Mitsuhiro、Ikegami Toru、Suzuki Shigeo
    • 雑誌名

      Journal of Chromatography A

      巻: 1566 ページ: 44~50

    • DOI

      10.1016/j.chroma.2018.06.050

    • 査読あり
  • [雑誌論文] On-line microchip electrophoresis-mediated preconcentration of cationic compounds utilizing cationic polyacrylamide gels fabricated by in situ photopolymerization2018

    • 著者名/発表者名
      Yamamoto Sachio、Okada Fuka、Kinoshita Mitsuhiro、Suzuki Shigeo
    • 雑誌名

      The Analyst

      巻: 143 ページ: 4429~4435

    • DOI

      10.1039/C8AN01159A

    • 査読あり
  • [学会発表] 8-Aminopyrene-1,3,6-trisulfonic acid標識化ガン細胞由来糖鎖の新規構造解析法の開発2018

    • 著者名/発表者名
      中住智典,山本佐知雄,木下充弘,鈴木茂生
    • 学会等名
      第38回キャピラリー電気泳動シンポジウム
  • [学会発表] 全自動マイクロチップ電気泳動装置を用いる次世代糖鎖プロファイリング法の開発2018

    • 著者名/発表者名
      木下充弘,山本万莉,山本佐知雄,鈴木茂生
    • 学会等名
      第38回キャピラリー電気泳動シンポジウム
  • [学会発表] 部分導入アフィニティーキャピラリー電気泳動、HPLC、MSを組み合わせた8-Aminopyrene-1,3,6-trisulfonic acid標識化ガン細胞由来糖鎖の網羅的解析2018

    • 著者名/発表者名
      山本佐知雄, 中住智典, 宮脇直久, 須田暁, 木下充弘, 鈴木茂生
    • 学会等名
      第29回クロマトグラフィー科学会議
  • [学会発表] 抗体医薬の定常領域配列に着目した迅速糖鎖プロファイリング2018

    • 著者名/発表者名
      河崎拓也、山本佐知雄、鈴木茂生、木下充弘
    • 学会等名
      第68回 日本薬学会近畿支部総会・大会
  • [学会発表] 8-Aminopyrene-1,3,6-trisulfonic acid標識化ガン細胞由来糖鎖の構造解析2018

    • 著者名/発表者名
      中住智典、山本佐知雄、木下充弘、鈴木茂生
    • 学会等名
      第68回 日本薬学会近畿支部総会・大会
  • [学会発表] 二官能性蛍光試薬による糖タンパク質糖鎖の標識化並びに糖鎖ーレクチン相互作用解析への応用2018

    • 著者名/発表者名
      鈴木茂生,神村和希,安井瑞紀,井上裕也,藤井孝泰,山本佐知雄,木下充弘,藤巻真
    • 学会等名
      第31回 バイオメディカル分析科学シンポジウム
  • [学会発表] Application of Partial Filling Affinity Capillary Electrophoresis Using Lectins and Exoglycosidases for the Characterization of Glycoprotein-derived Oligosaccharides2018

    • 著者名/発表者名
      Shigeo Suzuki
    • 学会等名
      Sino-Japanese Joint Symposium on Separation Sciences
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] 糖タンパク質糖鎖の二官能性蛍光色素標識法の開発と糖鎖-レクチン相互作用解析への応用2018

    • 著者名/発表者名
      鈴木 茂生, 神村 和希, 安井 瑞紀, 井上 裕也, 藤井 孝泰, 山本 佐知雄, 木下 充弘
    • 学会等名
      日本分析化学会第78回分析化学討論会
  • [備考] 近畿大学薬学部薬品分析学研究室

    • URL

      https://www.phar.kindai.ac.jp/analche2/index.html

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公開日: 2019-12-27  

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