| 研究課題/領域番号 |
16K08480
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| 研究機関 | 関西医科大学 |
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研究代表者 |
山田 久夫 関西医科大学, 医学部, 教授 (00142373)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | ３次元電子顕微鏡 / 組織化学３次元画像 / 質量顕微鏡 / サテライト細胞 / 髄鞘 / 細胞動態 / O4モノクローナル抗体 |
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| 研究実績の概要 |
１）光顕組織化学画像取得後に走査電顕反射電子を利用した３次元画像取得をおこなって両者を統合させるための手技確立をおこなった。とくにarray-tomographyによる走査電顕反射電子３次元画像を得るための連続切片採取法について、改良を加え連続切片採取のための簡便器具の開発に成功、一般化して使用できるように工夫した。
２）皮質型サテライト細胞-オリゴデンドロサイト系譜の研究： 髄鞘形成細胞・オリゴデンドロサイトがもつ複合糖脂質・スルファチド類は、含まれる脂肪酸の種類が様々である。一方、オリゴデンドロサイトのマーカーとして確立されたO4モノクローナル抗体のエピトープは、髄鞘に豊富なC22やC24の脂肪酸を含むスルファチドと考えられてきたが、スルファチド合成が生化学的手法により確認できない幼若期オリゴデンドロサイトでも、この抗体によって免疫組織化学的陽性となることが、長らくこの分野の研究者にとって謎であった。この両者を解決するために質量分析および質量顕微鏡にて分子種を同定した結果、幼若期のオリゴデンドロサイトはC16やC18の脂肪酸を含むスルファチドを含有することが明らかとなった。また、O4モノクローナル抗体は脂肪酸と異なる分子内部位をエピトープとし、脂肪酸の炭素数に影響されることなくスルファチドを認識するという成果も得られた。
３）脊髄後根神経節のサテライト細胞-シュワン細胞系譜の研究： 偽単極性ニューロンのaxon-dendriteの無髄部に存在するグリア細胞は近位部から順にカルシウム依存性カリウムチャネル(Kca2.3)を持つもの、Kca2.3もOct-6も持たないもの、Oct-6をもつものに分類される。分裂能を持ったグリア細胞のうち、60-70％は遠位部に存在するOct-6陽性グリアで、約30％は近位部に存在するKca2.3含有グリア細胞であった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
光顕レベル組織化学に連携させた電顕レベルの３次元解析という手技が、本計画で重要な役割を演じるため、特にこの技術・機器の改良に取り組み手技を確立した。論文公開できるほどの成果が得られたため、この公表（論文投稿）を優先しておこなった。
また、質量顕微鏡や質量分析を用いたO4モノクローナル抗体のエピトープ解析について、本計画のみならず関係領域の研究者全体におおきな前提条件を提供する知見が得られたことから、この論文執筆およびそのためのデータ取得を優先させた。
それらの結果、計画書に記載の実験系は半年程度遅れていることになるが、全体の計画自体が大きく遅れているわけではない。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は、当初の計画通り、クプリゾン脱髄モデルなどを用い、チミジンアナログを用いた分裂細胞標識と分子マーカーの組織化学を光顕レベルでおこなったうえで、array-tomography法をおこない、３次元電顕画像を取得して観察をおこなう。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
先述のように、当初計画の実験より優先させるべき成果公開に関して時間がとられたため、分裂細胞追求の実験ができなかった。つまりチミジンアナログやその抗体などの試薬類の発注時期が次年度にずれ込んだため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
当初の実験計画から一部の計画修正が出たたものの、次年度（２年目）には当初の実験計画に加えて初年度に達成できなかった実験(チミジンアナログを使用する実験)も加えておこなう。
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