| 研究課題/領域番号 |
16K08499
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| 研究機関 | 鹿児島大学 |
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研究代表者 |
蓑部 悦子 鹿児島大学, 医歯学域医学系, 講師 (00448581)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | カルシウムチャネル / カルモジュリン / ATP / パッチクランプ法 / カルシウム |
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| 研究実績の概要 |
カルモジュリンはカルシウムチャネルの活性調節に必須であり、様々なモデルが提唱されているが、統一した見解はない。チャネルの活性とカルモジュリン結合部位との機能的相関を解明することを目的に遺伝子工学的手法によりカルモジュリンをC末端部にリンクさせたCav1.2チャネル（CaM-linked channel）を用いて、パッチクランプ法により以下の実験を行った。
カルモジュリンには4つのカルシウム結合部位があり、N末端側から1番目と2番目に、または3番目と4番目にアミノ酸変異を導入し、カルシウム非感受性とした。さらに全てに変異を導入した変異体を作成した。これらのCaMmut-linked channelはカルシウム濃度依存性のチャネル活性の変化がなかった。よって、チャネルの活性調節にはカルモジュリンの4つのカルシウム結合部位が機能することが必要であることが示唆された。
我々は、以前にカルシウムチャネルはカルモジュリン濃度に依存して不活性化することを報告した。そこでCaM-linked channelに高濃度のカルモジュリンを付加したところ、野生型チャネルと同様にカルモジュリン濃度に依存した不活性化が確認できた。チャネルの不活性化に関係するカルモジュリンの結合部位を探索するために、CaM-linked channelのチャネルN末端部またはC末端部のカルモジュリン結合部位に変異を導入し、複数の変異体を作成した。変異導入部位は、過去の報告や、我々が結合実験により見出したモデルを参考にした。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
パッチクランプ実験機材の不具合、故障等により、調整に時間を要した。また、実験データの記録自体も不安定であった。
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| 今後の研究の推進方策 |
CaM-linked channelのチャネルN末端部またはC末端部のカルモジュリン結合部位に変異を導入し、複数の変異体を作成した。過去の報告を参考にし、チャネル不活性化への影響が高いと予想される変異体から順に解析を進める。
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