脂質メディエーター結合タンパク質の網羅的同定と生理機能の解明

2016 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 16K08596
• 研究機関: 順天堂大学
• 研究代表者: 奥野 利明 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (60361466)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: 脂質生化学 / ケミカルバイオロジー

研究実績の概要

生体内には多彩な脂質メディエーターが存在し、多種多様な生理機能を発揮することが明らかにされている。特に近年、質量分析機の革新的な進歩によって、ごく微量に存在する新規の生理活性脂質が同定されている。しかしながら、生理活性脂質の中には、受容体、輸送体、代謝酵素などの結合タンパク質が未同定な分子も多く存在する。本研究は、ケミカルバイオロジーの手法を用いて脂質メディエーターの新規結合タンパク質を同定し、脂質メディエーターの新しい生理機能や制御機構を明らかにすることを研究目的とする。
本年度は、脂質メディエーターとジアジドプローブをアミド結合させた脂質プローブが機能するかを、より簡単な構造を有する脂質であるアラキドン酸(AA)とエイコサペンタエン酸(EPA)を用いて検討した。ジアジド基を有するプローブをアラキドン酸、またはEPAにアミド結合させ、HEK293細胞に添加することで、標的とするタンパク質と特異的に結合するかの検討を行った。
HEK293細胞にアラキドン酸プローブ、またはEPAプローブを添加後、UV照射を行い、標的タンパク質と結合させた。細胞を溶解させた後、クリック反応でアジド基をCy5-アルキンと結合させ、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った。Cy5の蛍光を蛍光イメージャーで取得したところ、脂質プローブを添加させたサンプルで比較的濃いバンドを検出することができた。したがって、作成した脂質プローブがきちんと機能していることがわかった。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

脂質メディエーターのケミカルプローブ作成まで達成したかったが、条件検討に時間を有しているため。

今後の研究の推進方策

脂質プローブの有効性の検証を速やかに実施し、脂質メディエーターのケミカルプローブ作成に取り掛かる。

次年度使用額が生じた理由

当初の計画まで研究が進展しなかったため。

次年度使用額の使用計画

消耗品の購入に充て、研究を進展させる。

研究成果

• [雑誌論文] Intravenous anesthetic propofol binds to 5-lipoxygenase and attenuates leukotriene B4 production. (2017)
  • 著者名/発表者名: Okuno T, Koutsogiannaki S, Ohba M, Chamberlain M, Bu W, Lin F Y, Eckenhoff R G, Yokomizo T, Yuki K.
  • 雑誌名: FASEB J 巻: 31 ページ: 1584-1594
  • DOI: 10.1096/fj.201601095R
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Prolonged exposure to volatile anesthetic isoflurane worsens the outcome of polymicrobial abdominal sepsis. (2017)
  • 著者名/発表者名: Koutsogiannaki S, Schaefers M M, Okuno T, Ohba M, Yokomizo T, Priebe G P, DiNardo J A, Sulpicio S G, Yuki K.
  • 雑誌名: Toxicol Sci 巻: 156 ページ: 402-411
  • DOI: 10.1093/toxsci/kfw261
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] chiki T, Koga T, Okuno T, Saeki K, Yamamoto Y, Yamamoto H, Sakaguchi M, Yokomizo T. Modulation of leukotriene B4 receptor 1 signaling by receptor for advanced glycation end products (RAGE). (2016)
  • 著者名/発表者名: Ichiki T, Koga T, Okuno T, Saeki K, Yamamoto Y, Yamamoto H, Sakaguchi M, Yokomizo T.
  • 雑誌名: FASEB J 巻: 30 ページ: 1811-1822
  • DOI: 10.1096/fj.201500117
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Leukotriene B4 receptor type 2 (BLT2) enhances skin barrier function by regulating tight junction proteins. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ishii Y, Saeki K, Liu M, Sasaki F, Koga T, Kitajima K, Meno C, Okuno T, Yokomizo T.
  • 雑誌名: FASEB J 巻: 30 ページ: 933-947
  • DOI: 10.1096/fj.15-279653
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Leukotriene B4 receptor type 2 protects against pneumolysin-dependent acute lung injury. (2016)
  • 著者名/発表者名: Shigematsu M, Koga T, Ishimori A, Saeki K, Ishii Y, Taketomi Y, Ohba M, Jo-Watanabe A, Okuno T, Harada N, Harayama T, Shindou H, Li J D, Murakami M, Hoka S, Yokomizo T.
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 6 ページ: 34560
  • DOI: 10.1038/srep34560
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [学会発表] Protective roles of 12-hydroxyheptadecatrienoic acid/BLT2 in acute lung injury. (2017)
  • 著者名/発表者名: Shigematsu M, Koga T, Saeki K, Ohba M, Okuno T, Yokomizo T.
  • 学会等名: Keystone Symposium, Lipidomics and Bioactive Lipids in Metabolism and Disease
  • 発表場所: Granlibakken Tahoe
  • 年月日: 2017-02-26 – 2017-03-03
  • 国際学会
• [学会発表] RAGEはロイコトリエンB4第一受容体と機能的に相互作用する (2016)
  • 著者名/発表者名: 市木貴子, 古賀友紹, 奥野利明, 佐伯和子, 阪口政清, 山本靖彦, 横溝岳彦.
  • 学会等名: 第89回日本生化学会
  • 発表場所: 仙台
  • 年月日: 2016-09-25 – 2016-09-27
• [学会発表] The roles of 12-hydroxyheptadecatrienoic acid/BLT2 axis in skin. (2016)
  • 著者名/発表者名: Shigematsu M, Koga T, Saeki K, Okuno T, Yokomizo T.
  • 学会等名: 57th ICBL, International Conference on the Bioscience of Lipids
  • 発表場所: Chamonix-Mont-Blanc
  • 年月日: 2016-09-04 – 2016-09-08
  • 国際学会
• [学会発表] 2-hydroxyheptadecatrienoic acid (12-HHT) as a novel lipid mediator. (2016)
  • 著者名/発表者名: Yokomizo T, Y I, Shimegatsu M, Saeki K, Okuno T.
  • 学会等名: 第58回日本脂質生化学会
  • 発表場所: 秋田
  • 年月日: 2016-06-09 – 2016-06-10
• [学会発表] 持久的運動トレーニングおよび高脂肪食餌負荷が骨格筋のリン脂質濃度に及ぼす影響 (2016)
  • 著者名/発表者名: 川西範明, 高木香奈, 李賢哲, 奥野利明, 横溝岳彦, 町田修一
  • 学会等名: 第58回日本脂質生化学会
  • 発表場所: 秋田
  • 年月日: 2016-06-09 – 2016-06-10
• [学会発表] Receptor for advanced glycation endproducts modulates leukotriene B4 receptor 1 signaling. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ichiki T, Koga T, Okuno T, Saeki K, Yamamoto Y, Sakaguchi M, Yokomizo T.
  • 学会等名: ASBMB meeting
  • 発表場所: San Diego
  • 年月日: 2016-04-02 – 2016-04-06
  • 国際学会
• [学会発表] Generation of chimeric high-affinity monoclonal antibody for FLAG tag. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ikeda K, Sasaki F, Ueno A, Okuno T, Koga T, Yokomizo T.
  • 学会等名: ASBMB meeting
  • 発表場所: San Diego
  • 年月日: 2016-04-02 – 2016-04-06
  • 国際学会
• [学会発表] BLT2 receptor protects against lethal acute lung injury induced by a pneumococcal toxin pneumolysin. (2016)
  • 著者名/発表者名: Shigematsu M, Koga T, Saeki K, Okuno T, Yokomizo T.
  • 学会等名: ASBMB meeting
  • 発表場所: San Diego
  • 年月日: 2016-04-02 – 2016-04-06
  • 国際学会
• [備考] researchmap 奥野利明
  • URL: http://researchmap.jp/toshiakiokuno