| 研究課題/領域番号 |
16K08600
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| 研究機関 | 愛知医科大学 |
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研究代表者 |
林 寿来 愛知医科大学, 医学部, 講師 (30533715)
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| 研究分担者 |
中原 努 北里大学, 薬学部, 教授 (10296519)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 血管新生 / 脈絡膜 / 加齢黄斑変性 / VEGF / G protein |
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| 研究実績の概要 |
高齢化社会の進展に伴い、失明原因として加齢黄斑変性が増加している。日本人に多い滲出型では、脈絡膜から露出した血管が黄斑部で血管新生を起こし、網膜機能を破綻させ視力に異常をきたす。そのため、脈絡膜から派生する血管新生の抑制、血管新生誘導因子である血管内皮増殖因子(VEGF)シグナルの阻害こそが滲出型加齢黄斑変性疾患の治療の鍵となるとされている。我々は以前、三量体G蛋白質の新規制御因子であるActivator of G-protein signaling 8 (AGS8)を同定した。培養血管内皮細胞HUVECにおいてAGS8はVEGF２型受容体と結合してVEGFシグナルを制御する因子であることを報告した。そこで本研究では、加齢黄斑変性におけるAGS8の重要性の解明とその制御を目指した。まず、光凝固レーザー照射によってマウス脈絡膜に血管新生の誘導を行った。Realtime-PCRおよび免疫染色によると、AGS8は術後２－４日目に有意に発現量が増加しており、その発現部位は脈絡膜由来の新生血管特異的であることが判明した。そこでAGS8 siRNAを硝子体内に投与し脈絡膜におけるAGS８発現を抑制したところ、レーザー照射による脈絡膜新生血管の面積が減少した。また、ex vivo培養系による管腔形成実験において、VEGFが誘導する脈絡膜内皮細胞の管腔形成能はAGS8 siRNAによるknockdownによって有意に抑制された。さらに、脈絡膜由来の培養内皮細胞においては、AGS8 knockdownの結果、VEGFが惹起するVEGFR-2のリン酸化が抑制されるとともに、管腔形成や細胞移動も同時に抑制された。以上のことからAGS8は脈絡膜内皮細胞においてもVEGFシグナルを制御し、生体内で血管新生を制御していること、AGS8発現の抑制は脈絡膜血管新生を特異的に抑制することが明らかになった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
予定通り順調であり、脈絡膜血管新生におけるAGS8の特異性、重要性とその機能抑制効果を確認することができた。
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| 今後の研究の推進方策 |
（１）これまでの検討で、siRNAのマウス硝子体への導入効果は顕著に見られた。同様にAGS8-Gbeta-gamma結合を阻害するAGS8-peptideの導入によっても血管新生の抑制に対して同様の効果が見られるのかについて解析を行いたい。そのために、peptide導入試薬とともにpeptideを硝子体に投与し、新生血管への影響を検討する予定である。
（２）AGS8-peptideにおける新生血管阻害効果（Martrigel移植法）の解析
AGS8の脈絡膜以外での効果を確認する。そのために、AGS8-peptideとMatrigelをマウス皮下へ移植、侵入する新生血管を解析ソフトで定量する。
（３）VEGFR-2細胞内局在の変化の解析
細胞質分画のVEGFR-2は細胞膜表面と細胞質内（ゴルジ、小胞体）に存在する。これまでの研究から、AGS8はVEGFR-2を細胞質から細胞膜へソートすることでVEGFシグナルを制御していると考えられる。そこで、AGS8-peptide導入によりAGS8:Gbeta結合の阻害における、VEGFR-2の細胞内局在の変化を細胞免疫染色およびFlow Cytometerによって解析を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
必要な試薬、消耗品が割引額で購入することができたため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
少額であるため消耗品購入に使用する予定である。
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