アルツハイマー病におけるアポEの役割の解明：アポEノックアウトウサギを用いた研究

2017 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 16K08615
• 研究機関: 山梨大学
• 研究代表者: 小幡 史子 山梨大学, 大学院総合研究部, 助教 (80333566)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: アルツハイマー病 / 動物モデル / ノックアウトウサギ / コレステロール / アポE / ビルショウスキー染色 / 神経細胞萎縮

研究実績の概要

ウサギの脳において、アルツハイマー病の指標となる組織障害を半定量的に計測した。具体的には、ビルショウスキー染色を行い、アルツハイマー病に関連するとされる部位である海馬（歯状回、CA1領域、CA3領域）、嗅内皮質、脳梁膨大後部皮質における神経細胞核の長さを計測することにより、血中コレステロールに長期間暴露された個体では、神経細胞萎縮が促進することを明らかにした。
これまで、疫学的には中年世代での高コレステロール血症と高齢になってからの認知症の発症の関連は言われてきたが、実験的に血中コレステロールの上昇と認知症、特にアルツハイマー病の病理学的組織障害像との関連は詳しく調べられていなかったが、今回の研究により、実験的な評価への道筋が示されたことは、上記の関連性を調べる上で重要だと考えられる。

現在までの達成度 (区分)

4: 遅れている

理由

平成28年度に発生したウサギの感染症により、全頭屠殺とした経緯がり、平成29年度は保存していたApoEヘテロノックアウトウサギ精子から、野生型との交配を進め、さらにヘテロノックアウト同士の交配からホモノックアウトの実験群作製に勤めてきたが、個体数が確保できていないことから実験に至っていないため、当初の予定よりも遅れている。このため、平成29年度は、アッセイ法を確立し、精度を高める目的で、野生型にコレステロール食を与えた群や遺伝的にlow density lipoprotein受容体(LDLR)が欠損しているために血中コレステロールが上昇するWHHLウサギを用いて、ウサギ脳の評価を行った。

今後の研究の推進方策

今年度はウサギApoEホモノックアウト(ApoEKO)の個体数の確保が見込まれる。まず、3か月齢に達した野生型およびApoEKOをグループ1野生型0％コレステロール食群、2 野生型0.3％コレステロール食群、3 ApoEKO0％コレステロール食群、4 ApoEKO 0.3% コレステロール食群に分ける（雄、雌の数を各群一定になるように、かつ一群10羽となるように分ける）。各群、設定された食事を10週にわたり行う。血液を一週間ごとに採取し、総コレステロール値、中性脂肪値、high-density lipoprotein (HDL)値の測定、および肝機能のマーカーATL, AST, gammaGTP, LDH, ALPを測定する。餌の摂取量（24時間ごと）および体重（週ごと）を測定する。10週目には、脳サンプルの採取を行い、脳組織でのアルツハイマー型の病理変化の評価を行う予定である。