適正製造規範に適合する簡易精製が可能な次世代AAVベクターの開発 その２

2018 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 16K08644
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 人類遺伝学
• 研究機関: 日本医科大学
• 研究代表者: 平井 幸彦 日本医科大学, 大学院医学研究科, 研究生 (10089617)
• 研究期間 (年度): 2016-10-21 – 2019-03-31
• キーワード: AAVベクター / 適正製造規範 / 簡易精製法

研究成果の概要

クロマトグラフィー技術のみで高品質なAAV9 ベクター精製法を確立した。ウイルスゲノム配列・ゲノム構造にも非依存性で、総力価が10E+14 ウイルスゲノム 以上のAAV9 ベクターを調製できた。中空粒子の混入率を電子顕微鏡観察から算出すると、どれも5%以下と、高純度に再現性を持た精製方法であることが示された。分析用超遠心分離法による全長ゲノムを含む粒子の解析では、38% となり、作成・精製法の更なる改良が必要であることを示唆する。Mol Ther Methods Clin Dev. 2018; 11: 180-190に掲載された。

自由記述の分野

分子遺伝医学

研究成果の学術的意義や社会的意義

標準作業手順上の煩雑さを含む超遠心分離を含まないtype 9 AAVベクターの作成・精製のdown-stream processingを確立した。ウイルスゲノム配列（GOI）・ゲノム構造にも非依存性で、10E+14 ウイルスゲノム 以上の総力価を大学研究室設備で調製できた。電子顕微鏡観察からの中空粒子の混入率はどれも5%以下と、高純度に再現性をもつ精製方法であった。しかし、分析用超遠心分離法による全長ゲノムを含む粒子の解析では、アフィニティークロマトを用いない本法でも38% となり、高い遺伝子導入効率を有するAAVベクターの作成・精製にはの更なる改良が必要であることを示唆した。