2017 年度実施状況報告書

成人T細胞白血病のプロテオーム解析による病態と臨床標的分子の解明

研究課題

研究課題/領域番号	16K08665
研究機関	大阪大学
研究代表者	本間圭一郎大阪大学, 医学系研究科, 助教 (20505945)
研究期間 (年度)	2016-04-01 – 2019-03-31
キーワード	悪性リンパ腫 / 成人Ｔ細胞白血病
研究実績の概要	前年度までに成人Ｔ細胞白血病細胞株ATN-1と、GFP組み換えVSGでpseudotyingしたHTLV-Iを感染させたT細胞から抽出した蛋白質をリン酸化アフィニティーカラムで精製し、iTRAQにより成人T細胞白血病細胞株で発現亢進が見られた蛋白質を3種類同定した。これらはいずれもERKファミリーであった。今年度はそれぞれの蛋白質をコードする遺伝子について、臨床検体における遺伝子変異の有無を次世代シークエンスによって検討したが、これらの遺伝子には既報と同様のRHOAの変異以外、新規遺伝子変異は検出されなかった。次世代シークエンスではSTAT3の変異が高頻度に認められたことから、STAT3を対象にCHIP-seqを行ったところ、発現亢進が見られた蛋白をコードする遺伝子はいずれもATN-1ではSTAT3 bindingが認められた。つぎにSTAT3変異体とSTAT3 wild typeにおける検討を行い、これらの遺伝子はSTAT3変異体においてのみプロモーター領域への結合が認められた。現在GFP組み換えVSGでpseudotyingしたHTLV-Iを感染させたT細胞に発現亢進がみられた遺伝子の導入を施行中で、現在までのところ過剰発現による増殖への影響は明らかではない。不死化への影響について現在検討中である。ATN-1細胞株へのsiRNAによるノックダウンで細胞死が誘導されることから、腫瘍の生存、維持に重要な役割を果たしていると考えられる。またこのことから、これらの蛋白が関わるシグナルが治療のターゲットとなりうることが示唆される。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 2: おおむね順調に進展している理由当初の予定通り候補蛋白質の同定から、その発現亢進のメカニズム解明まで終了し、機能解析に移行している。
今後の研究の推進方策	発現亢進が見られた蛋白の造腫瘍性や治療ターゲットの可能性について検討する。特にSTAT3の変異が関わることからSTAT3阻害の有用性について検討する。STAT3阻害は他の腫瘍では、腫瘍微小環境との相互作用から、vitroでの腫瘍単体で予測される効果ほどvivoでの効果が得られないことが多いので、ATN-1の免疫不全マウスへのxenograft modelによるvivoでの実験も検討する。