タイト結合ストレスでおきる細胞接着の異常が決定する細胞の形と運命

2016 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 16K08693
• 研究機関: 札幌医科大学
• 研究代表者: 澤田 典均 札幌医科大学, 医学部, 教授 (30154149)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: タイト結合 / claudin-18 / シグナル伝達 / 造腫瘍性 / フェンス機能

研究実績の概要

我々は、胆管癌の前癌状態において、claudin-18が高発現し、胆管癌のマーカーとなりうることを示した。(Keira, et al., Virchow Arch., 2015).
胆管癌は、ras変異が高頻度で起こることが知られており、claudin-18の機能を調べるため、ras変異がないヒト胆管癌細胞株(TKKK)を用いて、claudin-18の高発現と遊走能、増殖能、造腫瘍能について検討した。その結果以下のことが明らかになった。
１）claudin-18をsiRNAを用いてノックダウンするとBrdUの取り込みが有意に低下した。又、invasion Assayも有意に低下した。２）claudin-18の第1細胞外ループに対する特異抗体を作用させると、細胞増殖は有意に低下した。３）TKKK細胞シートを用いて、ligand-receptor segregationを破壊し、wound healingの過程を観察すると、wound edge にclaudin-18が高発現していた。スクラッチ後60分で、ERK1/2のリン酸化、AKTのリン酸化、pan-PKCのリン酸化が認められた。ERKの活性化を伴っていた。
４）EGF-Rを活性化すると、EGFの濃度依存性にclaudin-18の発現が有意に上昇し、EGFR活性化阻害剤とERK1/2活性化阻害剤で、claudin-18の発現上昇が抑制された。５）免疫不全マウスに移植したTKKK細胞の造腫瘍性はclaudin-18のsiRNAを投与すると有意に低下した。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

シート状に培養した細胞に、woundをつけるとwound edgeにclaudin-18の発現が上昇した。wound signalは、ERK1/2経路を介していた。これはwoundによるタイト結合ストレスによるものと考えられる。

今後の研究の推進方策

今後は、ホルモン環境の変化によるタイト結合ストレスを検討する。

研究成果

• [雑誌論文] Analysis of the expression and localization of tight junction transmembrane proteins, claudin-1, -4, -7, occludin and JAM-A, in human cervical adenocarcinoma. (2016)
  • 著者名/発表者名: Akimoto T, Takasawa A, Murata M, Kojima Y, Takasawa K, Nojima M, Aoyama T, Hiratsuka Y, Ono Y, Tanaka S, Osanai M,Hasegawa T, Saito T, Sawada N.
  • 雑誌名: Histol Histopathol 巻: 31(8) ページ: 921-931
  • DOI: 10.14670/HH-11-729.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Increased expressions of claudin 4 and 7in atypical adenomatous hyperplasia and adenocarcinoma of the lung. (2016)
  • 著者名/発表者名: Yamada G, Murata M, Takasawa A, Nojima M, Mori Y, Sawada N, Takahashi H.
  • 雑誌名: Med Mol Morphol 巻: 49(3) ページ: 163-169
  • DOI: 10.1007/s00795-016-0135-6.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Claudins-4 and -7 might be valuable markers to distinguish hepatocellular carcinoma from cholangiocarcinoma. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ono Y, Hiratsuka Y, Murata M, Takasawa A, Fukuda R, Nojima M, Tanaka S, Osanai M, Hirata K, Sawada N.
  • 雑誌名: Virchows Arch 巻: 469(4) ページ: 417-426
  • DOI: 10.1007/s00428-016-1984-z.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Claudins in cancer: bench to bedside. (2016)
  • 著者名/発表者名: Osanai M, Takasawa A, Murata M, Sawada N.
  • 雑誌名: Pflugers Ach 巻: 469(1) ページ: 55-67
  • DOI: 10.3892/or.2016.5072.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Nuclear localization of tricellulin promotes the oncogenic property of pancreatic cancer. (2016)
  • 著者名/発表者名: Takasawa A, Murata M, Takasawa K, Ono Y, Osanai M, Tanaka S, Nojima M, Kono T, Hirata K, Kojima T, Sawada N.
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 19(6) ページ: 33582
  • DOI: 10.1038/srep33852.
  • 査読あり