核内受容体HNF4αとPPARによるNASH発症機序の解明と治療応用への基礎研究

2017 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 16K08728
• 研究機関: 群馬大学
• 研究代表者: 井上 裕介 群馬大学, 大学院理工学府, 准教授 (90304302)
• 研究分担者: 阪口 政清 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 准教授 (70379840) ; 柿崎 暁 群馬大学, 大学院医学系研究科, 講師 (80344935)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: 脂肪肝 / 核内受容体 / マウスモデル

研究実績の概要

核内受容体HNF4αの肝臓特異的欠損マウス（Hnf4aΔHマウス）は脂肪肝を経てNASHを発症し、さらに核内受容体PPARαを欠損させたダブル欠損マウスがNASH改善を示すことを見出している。このため、Hnf4aΔHマウスでのPPARαの活性化がNASH発症に寄与していることが予測された。今年度はPPARαの活性化によって誘導されるFATP1を発現誘導可能なヒト肝がん細胞株を作製した。その結果、FATP1の発現誘導により脂肪が蓄積することが分かった。従って、予想どおりHnf4aΔHマウスではPPARαの活性化によるFATP1やCideAの発現増加により、脂肪肝が促進されていることが予想される。また、Hnf4aΔHマウスで発現低下するmiRNAとしてmiR-130a-5p、miR-194-5p、miR-193aを同定しているが、今年度はヒト細胞株でmiRNAを強制発現した後、免疫沈降によるその標的遺伝子の同定に関する実験を新たに行い、現在ChIP-seq解析を行っている。これに加えて、Hnf4aΔHマウスで発現低下するmiRNAとしてmiR-455-3pを新たに同定した。ヒト肝癌細胞でHNF4αをsiRNAを用いて発現抑制することにより、miR-455-3pの発現が低下したため、miR-455-3pはHNF4αの新規標的遺伝子であることが示唆された。さらに、miR-455-3pの標的遺伝子として肝臓の線維化に関与する遺伝子をレポーターアッセイにより同定し、Hnf4aΔHマウスでの発現増加も確認できた。このため、HNF4αはmiR-455-3pを介して肝臓の線維化を抑制していることが示唆される。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

おおむね達成できたため

今後の研究の推進方策

miRNAの標的遺伝子の同定やFATP1、CideAなどのPPARα標的遺伝子のNASH進行への関与を解析し、HNF4α/PPARαカスケードによるNASH進行に果たす役割を解明する。

研究成果

• [雑誌論文] β-1,3-galactosyl-O-glycosyl-glycoprotein β-1,6-N-acetylglucosaminyltransferase 3 increases MCAM stability, which enhances S100A8/A9-mediated cancer motility. (2018)
  • 著者名/発表者名: Sumardika IW, Youyi C, Kondo E, Inoue Y, Ruma IMW, Murata H, Kinoshita R, Yamamoto KI, Tomida S, Shien K, Satoh H, Yamauchi A, Futami J, Putranto EW, Hibino T, Toyooka S, Nishibori M, Sakaguchi M.
  • 雑誌名: Oncol Res 巻: 26 ページ: 431-444
  • DOI: 10.3727/096504017X15031557924123.
  • 査読あり
• [雑誌論文] An HNF4α-microRNA-194/192 signaling axis maintains hepatic cell function. (2017)
  • 著者名/発表者名: Morimoto A, Kannari M, Tsuchida Y, Sasaki S, Saito C, Matsuta T, Maeda T, Akiyama M, Nakamura T, Sakaguchi M, Nameki N, Gonzalez FJ, and Inoue Y.
  • 雑誌名: J. Biol. Chem. 巻: 292 ページ: 10574-10585
  • DOI: 10.1074/jbc.M117.785592.
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Expression of tumor suppressor REIC/Dkk-3 by a newly improved adenovirus vector with insertion of an hTERT promoter at the 3’-side of the transgene. (2017)
  • 著者名/発表者名: Putranto EW, Kinoshita R, Watanabe M, Sadahira T, Murata H, Yamamoto KI, Futami J, Kataoka K, Inoue Y, Ruma IM, Sumardika IW, Youyi C, Kubo M, Sakaguchi Y, Saito K, Nasu Y, Kumon H, Huh NH, and Sakaguchi M.
  • 雑誌名: Oncol. Lett. 巻: 14 ページ: 1041-1048
  • DOI: 10.3892/ol.2017.6201.
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel partial agonist of GPBA reduces blood glucose level in a murine glucose tolerance test. (2017)
  • 著者名/発表者名: Enomoto R, Kurosawa A, Nikaido Y, Mashiko M, Saheki T, Nakajima N, Kuroiwa S, Otobe M, Ohsaki M, Tooyama K, Inoue Y, Kuwabara N, Kikuchi O, Kitamura T, Kojima I, Nakagawa Y, Saito T, Osada H, Futahashi M, Sezutsu H, and Takeda S.
  • 雑誌名: Eur. J. Pharmacol. 巻: 814 ページ: 130-137.
  • DOI: 10.1016/j.ejphar.2017.08.017.
  • 査読あり
• [学会発表] 核内受容体HNF4γによる肝がん細胞の再分化誘導 (2017)
  • 著者名/発表者名: 浦部瑞穂、佐々木翔太、前田つかさ、鈴木淳子、入江亮太、阪口政清、Gonzalez J. Frank、井上裕介
  • 学会等名: 第40回日本分子生物学会
• [学会発表] Application of hepatocyte nuclear factor 4γ for establishment of differentiated hepatocytes (2017)
  • 著者名/発表者名: S. Sasaki, M. Urabe, T. Maeda, J. Suzuki, R. Irie, M. Sakaguchi, F.J. Gonzalez, and Y. Inoue
  • 学会等名: 4th International Conference on Pharmaceutical and Biomedical Engineering
  • 国際学会
• [学会発表] Induction of hepatocyte-specific gene expression by a novel nuclear receptor (2017)
  • 著者名/発表者名: S. Sasaki, M. Urabe, T. Maeda, J. Suzuki, R. Irie, S. Kakizaki, F.J. Gonzalez, and Y. Inoue
  • 学会等名: 4th International Symposium of Gunma University Medical Innovation and Advanced Micro-Device Engineering
  • 国際学会
• [学会発表] 肝臓におけるmiRNAを介した新規HNF4αネットワークの解明 (2017)
  • 著者名/発表者名: 秋山萌、守本葵、神成真名、土田雄一、松田強志、齊藤千夏、佐々木翔太、前田つかさ、阪口政清、Frank Gonzalez、井上 裕介
  • 学会等名: 第40回日本分子生物学会