| 研究課題/領域番号 |
16K08777
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
菅井 基行 広島大学, 医歯薬保健学研究科(歯), 教授 (10201568)
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| 研究分担者 |
久恒 順三 広島大学, 医歯薬保健学研究科(歯), 助教 (40513180)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | CA-MRSA / ST8 / TSST-1 |
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| 研究実績の概要 |
（１）ゲノタイピング 昨年度から引続きに福山臨床検査センターより皮膚感染症由来のStaphylococcus aureusの分与を受け、PCRによるゲノタイピングを行いCA-MRSA-ST8-SCCmecIVl株の分離頻度を調査した。皮膚感染症由来560株のうちST8に属する株が22.7%で褥瘡、開放膿、非開放膿の順で検出され、特に褥瘡、開放膿で多かった。全体に占めるST8-SCCmecIVlは4.8%、ST8全体の21.3%がST8-SCCmecIVlであった。またST8-SCCmec IVlの40.7%がTSST-1, SEC, SE1 (旧SEZ), EDINA遺伝子を保有していた。またST8のうちmecAを保有しないが、TSST-1, SECを産生し、 一部はSE1, EDINAをも産生する株がST8全体の14.2%を占めた。
（２）トランスクリプトーム解析 ST8-SCCmecIVl株の毒素産生制御の全体像を明らかにするために、MiSeqシステムを用いたRNA-Seq法によりTSST-1を保有するST5株と比較解析した。その結果、tst1遺伝子の発現はST5よりもST8-SCCmecIVl株で顕著に高かった。また、agrオペロン遺伝子群の発現量がST8-SCCmecIVl株で極めて高いことが判明し、agr制御下の遺伝子群も高発現していた。さらに、これらの遺伝子および複数の転写因子に関してリアルタイムPCRにより検証した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
「①分子疫学的な調査及び比較ゲノム解析 １）臨床分離された株の病原因子関連遺伝子の解析」と、「②病原因子の性状及び病態解析 １）トランスクリプトーム解析による探索」については順調な進捗を示している。①２）糖不応答性に寄与する因子の毒素産生評価 前年度のGWAS解析では有意に異なるDNA領域を見出されず、TSST-1産生評価における比較対象株の変更を余儀なくされた。本年度はST8-SCCmec系統株の中でTSST-1産生を示さない株が見出されたので、この株を比較対象株に解析を進めることとなった。加えて、菌のコロニースプレッティングを解析した結果、ST5よりもST8-SCCmecIVl株は顕著に活性が強いことがわかった。
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| 今後の研究の推進方策 |
TSST-1を産生するST8-SCCmecIVIとST5系統株のトランスクリプトーム解析により、tst1の発現量が顕著な差が認められ、転写因子sarS, rot, そして、ccpAなどの遺伝子発現が認められた。これまでに報告されているtst1遺伝子発現機構と系統株間での比較解析するために、今後の計画として、いくつかの転写因子について遺伝子欠損株を作製して検証する。加えて、ST8-SCCmecIViの同系統株でTSST-1の低発現株を比較対象株において、RNA-Seq解析によりTSSt-1産生機構について解析する予定である。
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