アンチトロンビン抵抗性検出における抗血栓薬治療の影響を回避する新規検出法の開発

2018 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16K08967
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 高木 明 名古屋大学, 医学系研究科(保健), 客員研究者 (30135371)
• 研究分担者: 小嶋 哲人 名古屋大学, 医学系研究科(保健), 教授 (40161913)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: 凝固第X因子 / アンチトロンビン / 抗血栓薬

研究実績の概要

ヒト凝固第X因子（野性型）の全長cDNA およびヒトFurin の全長cDNA をヒト肝臓由来cDNA ライブラリーよりPCR クローニングした。野生型凝固第X因子cDNAにアンチトロンビンとの親和性に重要と思われる部位(p.372Arg)に変異を導入し変異型cDNA をクローニングした。野生型および変異型凝固第X因子発現ベクターを作成した。Furin発現ベクターを構築し、凝固第X因子・Furin共安定発現細胞株の樹立を目指した。安定細胞発現細胞株作成に使用する細胞株を従来使用してきたHEK293に加えて、より発現量が多くなることを期待してHEK293T細胞も使用した。細胞株共発現のため細胞株選択に使用する抗生剤を２種類組み合わせて、より生理的なFurinによる水解を受けた２本鎖のリコンビナント凝固第X因子発現系を構築した。
生理的凝固第X因子アクチベータ（活性型第VII因子・組織因子・カルシウムイオン）を用いた凝固第X因子活性化法を検討した。変異凝固第X因子の性状、検出測定法を検討・設定し、アンチトロンビン抵抗性凝固第Xa 因子を検出する測定系を設定した。第Xa因子特異的発色性合成基質に従来品(S-2222)に比して高感度の基質(S-2765)が入手可能と2種類の発色性合成基質を使用した。アンチトロンビン抵抗性凝固第Xa因子検出検査法においても各種抗血栓薬（未分画ヘパリン、低分子量ヘパリン、フォンダパリヌクス、エドキサバン、リバーロキサバン、アピキサバン）の影響およびその回避法を検討した。

研究成果

• [雑誌論文] アンチトロンビン抵抗性の診断 -検査法を中心に- (2018)
  • 著者名/発表者名: 高木明、田村彰吾、小嶋哲人
  • 雑誌名: 日本検査血液学会誌 巻: 19 ページ: 393-400
• [雑誌論文] Optimisation of antithrombin resistance assay as a practical clinical laboratory test: Development of prothrombin activator using factors Xa/Va and automation of assay. (2018)
  • 著者名/発表者名: Tamura S, Suga Y, Tanamura M, Murata-Kawakami M, Takagi Y, Hottori Y, Kakihara M, Suzuki S, Takagi A, Kojima T.
  • 雑誌名: International Journal of Laboratory Hematology 巻: 40 ページ: 312-319
  • DOI: 10.1111/ijlh.12786. Epub 2018 Feb 13.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Familial pulmonary thromboembolism with a prothrombin mutation and antithrombin resistance (2018)
  • 著者名/発表者名: Yoshida R, Seki S, Hasegawa J, Koyama T, Yamazaki K, Takagi A, Kojima T, Yoshimura M.
  • 雑誌名: Journal of Cardiology Cases 巻: 17 ページ: 197-199
  • DOI: 10.1016/j.jccase.2018.02.001. eCollection 2018 Jun.
  • 査読あり
• [学会発表] 血漿検体測定を目指したアンチトロンビン抵抗性凝固第X因子検出法の構築 (2018)
  • 著者名/発表者名: 田村彰吾、高木 明、藤岡亮也、服部有那、垣原美紗樹、鈴木幸子、高木夕希、小嶋哲人
  • 学会等名: 第19回日本検査血液学会学術集会
• [学会発表] Many of the prothrombin mutations in the sodium-binding region cause an antithrombin- resistance phenotype (2018)
  • 著者名/発表者名: Shogo Tamura, Moe Murata-Kawakami, Yuki Takagi, Sachiko Suzuki, Akira Katsumi, Akira Takagi, Tetsuhito Kojima
  • 学会等名: 第40回日本血栓止血学会学術集会学術推進委員会シンポジウム
  • 招待講演
• [学会発表] アンチトロンビン抵抗性の診断 -検査法を中心に- (2018)
  • 著者名/発表者名: 高木明、田村彰吾、小嶋哲人
  • 学会等名: 第19回日本検査血液学会学術集会シンポジウム1 特発性血栓症
  • 招待講演