研究課題
血液中には細胞が崩壊した際に放出される遊離DNA（cell-free DNA：cfDNA）が存在し、がん患者ではcfDNA以外にも腫瘍細胞由来の循環DNA（circulating tumor DNA：ctDNA）が含まれる。近年、これらリキッドバイオプシーを用いた研究が盛んにおこなわれており、特にがん遺伝子の体細胞変異を高感度にキャプチャーすることによって、低侵襲かつ新たながん診断法の開発が進められている。KRAS遺伝子変異は大腸がんの約40%に認められる。そのため、ctDNAを用いてKRAS遺伝子変異を同定することは、がん診断の新たなバイオマーカーとして期待されている。そこで本研究ではKRAS遺伝子の変異配列に特異的に結合するピロールイミダゾール含有ポリアミド（PIポリアミド）にビオチンを付加した複合体を用いることで、cfDNA中の標的遺伝子を含む微量ctDNAを濃縮する技術を開発し、その臨床的有用性について検討した。患者血清サンプルはがん組織からKRAS 遺伝子変異型が同定されている大腸がん患者21例を用いた。これら保存血清からctDNAを抽出し、PIポリアミドにより変異アレルを濃縮した後にddPCRにより検出し、その感度をPIポリアミド濃縮前・後で比較した。患者背景およびがん組織KRAS変異型の比率は、それぞれステージⅠ/Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ：2/2/6/11およびG12C/G12S/ G12D/G12V：3/1/11/6であった。それぞれのKRAS変異に対応するそれぞれのPIポリアミドを使用し解析した結果、KRAS変異アレルの検出感度はステージⅣ症例では濃縮前・後ともに81.8%であった。一方、ステージⅠ/Ⅱ/Ⅲの早期の症例では濃縮前の検出感度は10%であったが、濃縮後では80%であり、有意に検出感度が向上した。これらのことから新たなctDNAの濃縮法の開発に成功した。
すべて 2019
すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 4件、 オープンアクセス 4件) 学会発表 (8件)
Sci Rep.
巻: 9(1) ページ: 982-986
10.1038/s41598-019-47700-9.
Jpn J Clin Oncol.
巻: 49(4) ページ: 339-346
10.1093/jjco/hyy189.
Br J Cancer.
巻: 120(10) ページ: 982-986
10.1038/s41416-020-0766-1.
Cancer Sci.
巻: 110(11) ページ: 3565-3572
10.1111/cas.14198.
