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2016 年度 実施状況報告書

C型肝炎のDAA治療で高度耐性株出現に関わるオセロ仮説と2-ヒット仮説の検証

研究課題

研究課題/領域番号 16K09372
研究機関埼玉医科大学

研究代表者

持田 智  埼玉医科大学, 医学部, 教授 (20219968)

研究期間 (年度) 2016-04-01 – 2019-03-31
キーワード肝臓学
研究実績の概要

オセロ仮説と2-ヒット仮説はdeep sequencingの手法で証明することを完了した(Uchida Y, et al. Hepatol Res 2016; 46:234-1246. Uchida Y, et al. Hepatol Res 2017 Feb 27.)。 このためDAAの範囲を核酸型NS5B阻害薬であるsofosbuvir(SOF)を用いた治療に拡大し,その効果を規定するNS5B-RASの成立機序を検討した。SOFとNS5A阻害薬であるledipasvir(LDV)の配合錠による治療でvirologic failureとなったgenotype 1bのHCV感染者を対象に,NS5B領域のアミノ酸配列を解析し,全例でA207T,A218S,N316N,Q464E変異が認められることが判明した。SOF未投与の108例では,これら4変異を有するHCV株は44例(42.6%)であり,NS5B領域の塩基配列を基にした系統樹解析では,genotype 1bのHCV株は,C316N変異の有無で2つのクラスターに分類された。Bioinformaticsによる検討では,aa207,aa218,aa316は活性化SOFの通過するNTPトンネルに沿って位置し,特にaa218は表面に露出していた。分子動力学シミュレーションでは,NS5BポリメラーゼにA218S変異を加えると,NTPトンネルを通過する際に必要なエネルギーが,UTPに比して活性化SOFで大きくなることが判明した。Aa218がAからSに変化すると同部位の環境が疎水性から親水性に変化する。UTPはフラン環の2位炭素に親水性の水酸基が付加しているのに対して,活性化SIFでは同部分には疎水性のフッ化メチル基が結合している。このためA218S変異のあるNS5Bポリメラーゼでは,NTPトンネルの通過効率が,UTPに比して活性化SOFで低下するため,virologic failureに繋がると考えられた。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

1: 当初の計画以上に進展している

理由

NS5A-RASに関する検討は予想以上に早期に進行している。オセロ仮説,2-ヒット仮説ともに,deep sequencingの解析が早期に終了し,予想以上に明確な成果が得られたことに起因している。このためNS5B-RASにも範囲を広げたが,早々にNS5B-A218S変異という有力な候補を見出し,bioinformatics,分子動力学シミュレーションなどの先端技術を利用することで,originalityの高い成果を得ている。同研究も現在,論文化しているところである。

今後の研究の推進方策

NS5A-RASに関しては,DCV/ASV治療のvirologic failure例に対してSOF/LDV治療を実施した場合の変動を,deep sequencingで検証することが課題として残っている。NS5B-RASはbioinformaticsおよび分子動力学シミュレーションによる検討を,genotype 2a,2bのHCV株にも広げることが課題である。

次年度使用額が生じた理由

物品購入を検討しましたが金額が端数のため使用できませんでした。

次年度使用額の使用計画

次年度に物品購入等で使用する予定です。

  • 研究成果

    (11件)

すべて 2017 2016

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件、 オープンアクセス 3件、 謝辞記載あり 3件) 学会発表 (8件) (うち国際学会 2件)

  • [雑誌論文] "Reversi-Type Virologic Failure" Involved in the Development of NS5A-RAVs in Patients with Genotype 1b HCV Carrying No Signature RAVs at Baseline.2017

    • 著者名/発表者名
      Uchida Y, Kouyama JI, Naiki K, Sugawara K, Inao M, Imai Y, Nakayama N, Mochida S.
    • 雑誌名

      Hepatol Res

      巻: - ページ: -

    • DOI

      10.1111/hepr.12882.

    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Significance of variants associated with resistance to NS5A inhibitors in Japanese patients with genotype 1b hepatitis C virus infection as evaluated using cycling-probe real-time PCR combined with direct sequencing.2016

    • 著者名/発表者名
      Uchida Y, Kouyama J, Naiki K, Sugawara K, Ando S, Nakaoa M, Motoya D, Inao M, Imai Y, Nakayama N, Mochida S.
    • 雑誌名

      J Gastroenterol

      巻: 51 ページ: 260-270

    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Development of rare resistance-associated variants that are extremely tolerant against NS5A inhibitors during daclatasvir/asunaprevir therapy by a two-hit mechanism.2016

    • 著者名/発表者名
      Uchida Y, Kouyama J, Naiki K, Sugawara K, Inao M, Imai Y, Nakayama N, Mochida S.
    • 雑誌名

      Hepatol Res.

      巻: 46 ページ: 1234-1246

    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [学会発表] Mechanisms Involved in the Development of NS5A-RAVs and NS5B-RAVs in Patients Receiving DAA Therapies.2017

    • 著者名/発表者名
      Mochida S.
    • 学会等名
      APASL Single Topic Conference
    • 発表場所
      長崎
    • 年月日
      2017-04-10 – 2017-04-12
  • [学会発表] DAA治療の非著効例におけるNS5A-RAVsに基づいた再治療の戦略. パネルディスカッション「C型肝炎の残された問題点」2016

    • 著者名/発表者名
      内田義人, 中山伸朗, 持田智.
    • 学会等名
      第41回日本肝臓学会東部会
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2016-12-08 – 2016-12-09
  • [学会発表] “Othello Hypothesis” Involved in the Development of NS5A-RAVs in Patients with Genotype 1b HCV Infection.2016

    • 著者名/発表者名
      Yoshihito UCHIDA, Jun-ichi KOUYAMA, Kayoko NAIKI, Yukinori IMAI, Nobuaki NAKAYAMA and Satoshi MOCHIDA
    • 学会等名
      The Liver Meeting, AASLD
    • 発表場所
      America Boston
    • 年月日
      2016-11-11 – 2016-11-15
    • 国際学会
  • [学会発表] DAA治療不成功例におけるRAVsの特性とその成立機序2016

    • 著者名/発表者名
      持田 智
    • 学会等名
      犬山シンポジウム
    • 発表場所
      愛知・犬山
    • 年月日
      2016-08-04 – 2016-08-04
  • [学会発表] NS5A阻害薬を用いたDAA治療におけるRAVsの成立機序:DCV/ASV併用療法から得られたオセロ仮説. シンポジウム「C型肝炎治療の新時代に向けて」2016

    • 著者名/発表者名
      内田義人, 中山伸朗, 持田智
    • 学会等名
      第52回日本肝臓学会総会
    • 発表場所
      千葉
    • 年月日
      2016-05-19 – 2016-05-20
  • [学会発表] DAA治療に高度耐性変異株の発生機序:DCV/ASV併用療法から得られた2-ヒット仮説. パネルディスカッション「C型肝炎治療の問題点」2016

    • 著者名/発表者名
      内田義人, 中山伸朗, 持田智
    • 学会等名
      第52回日本肝臓学会総会
    • 発表場所
      千葉
    • 年月日
      2016-05-19 – 2016-05-20
  • [学会発表] C型慢性肝疾患におけるDAA治療の課題. シンポジウム「C型肝炎治療の新時代と将来への展望」2016

    • 著者名/発表者名
      内田義人, 中山伸朗, 持田智
    • 学会等名
      第102回日本消化器病学会総会
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2016-04-21 – 2016-04-23
  • [学会発表] “Othello Hypothesis” Involved in the Development of RAVs Tolerant to NS5A Inhibitors in Patients with Genotype 1b HCV Infection.2016

    • 著者名/発表者名
      Yoshihito UCHIDA, Jun-ichi KOUYAMA, Kayoko NAIKI, Kayoko SUGAWARA, Mie INAO, Yukinori IMAI, Nobuaki NAKAYAMA and Satoshi MOCHIDA
    • 学会等名
      The International Liver Congress, EASL
    • 発表場所
      Spain Barcelona.
    • 年月日
      2016-04-13 – 2016-04-17
    • 国際学会

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公開日: 2018-01-16  

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