内在性遺伝子ターゲッティング法を用いた肝癌におけるp53アイソフォームの機能解析

2018 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16K09381
• 研究機関: 愛知医科大学
• 研究代表者: 中尾 春壽 愛知医科大学, 医学部, 教授 (60326139)
• 研究分担者: 太田 明伸 愛知医科大学, 医学部, 講師 (30438048) ; 稲熊 真悟 愛知医科大学, 医学部, 講師 (80410786)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: p53 isoform / 肝細胞癌 / delta40p53 / delta133p53 / p53beta / cellular senescence / tumor suppression

研究実績の概要

今年度は本研究課題であるp53スプライシングアイソフォームの機能解析範囲を昨年度までに解析した△40p53α、Δ133p53αだけでなく、p53のC末が欠失したアイソフォーム（p53β）まで広げて解析をおこなった。

EGFPを含有する全長のwild type p53（EGFP-FL-p53α）と全長のp53β（EGFP-FL-p53β）および各種アイソフォームのコントラスト（EGFP-△40p53α、EGFP-△133p53α）などを作成し、p53-/-内在性遺伝子破壊肝細胞株やTP53-/-である293T細胞、TP53wildであるHEK293細胞などを用いてβ型愛氏フォームの機能やアイソフォーム同士の相互作用を解析した。その結果、蛋白質レベルでp53α同士は結合しあうが、p53αとp53βは結合しないことが明らかとなった。さらにルシフェラーゼ・アッセイによりp53βはp53のDNA結合領域に結合する活性が高く、転写活性を介した増殖抑制効果を示すことが示唆された。子の活性にp53αの存在や結合は必要としなかった。一方、△40p53αや△133p53αは典型的なp53のDNA結合領域に結合することなく増殖抑制効果を発揮する可能性が示唆された。

p53アイソフォームのin vivoでの機能を検証するためにWBN/Kobラット、Wisterラットと線維化抑制剤を用いて肝がん発症の母体となる肝線維化や肝脂肪化とp53アイソフォームの関連を解析した。肝線維化や脂肪肝の程度は事件前の予想よりも強く発現しなかったが、現在も解析を継続中である。

研究成果

• [学会発表] 内在性遺伝子改変法を用いた肝癌におけるp53 splicing isoformの機能解析 (2018)
  • 著者名/発表者名: 中尾春壽 , 太田明伸 , 北野礼奈 , 坂本和賢 , 大橋知彦 , 中出幸臣 , 角田圭雄 , 伊藤清顕 , 米田政志
  • 学会等名: 第54回日本肝臓学会総会
• [学会発表] Delta40p53 suppresses tumor cell proliferation and induces cellular senescence in hepatocellular carcinoma cells. (2018)
  • 著者名/発表者名: Haruhisa Nakao, Akinobu Ota, Yumi Sawada, Sivasundaram Karnan, Md Wahiduzzaman, Tadashi Inoue, Yuji Kobayashi,Norimitsu Ishii, Tomohiko Ohashi, Yukiomi Nakade, Yoshio Sumida, Kiyoaki Itoh, Hiroyuki Konishi, Yoshitaka Hosokawa, Masashi Yoneda
  • 学会等名: the European Association for the Study of Liver: The International Liver Congress 2018 in Paris
  • 国際学会
• [学会発表] Delta133p53, One of the p53 Isoforms, Suppresses Tumor Cell Proliferation and Induces Cellular Senescence in Hepatocellular Carcinoma Cells (2018)
  • 著者名/発表者名: Haruhisa Nakao, Akinobu Ota, Mayu Ibusuki, Rena Kitano, Satoshi Kimoto, Tomohiko Ohashi, Yukiomi Nakade, Yoshio Sumida, Kiyoaki Itoh, Hiroyuki Konishi, Yoshitaka Hosokawa, Masashi Yoneda
  • 学会等名: the American Association for the Study of Liver Diseases. : The Liver Meeting® 2018 in San Francisco
  • 国際学会