| 研究実績の概要 |
ヒト胆管癌細胞Hucct-1、正常ヒト胆管上皮細胞MMNK-1にLPC 1～100μM, 9-HODE（G2Aリガンド） 0.1～10μM, LPC＋9HODEを添加して、以下の結果を得た。
１）変性脂質取り込み機構：G2A最大発現time pointにおけるLPC＋9HODEの併用添加によりsynergisticに増強した。２）細胞障害の評価：MTT assay（細胞数カウント）、LDH assay（生存細胞機能確認）により細胞死を濃度依存性、時間依存性に誘導した。３）アポトーシス評価：DAPI染色による形態評価、Annexin-V/PI二重染色フローサイトメトリーにより濃度依存性、時間依存性にアポトーシスが誘導された。４）Caspase活性評価：Caspase-3, -8, -9 （Assay kit）の結果は上記３）に矛盾しないものであった。５）アポトーシス関連遺伝子発現：GenbankおよびEnsemblから塩基配列を参照し、primer3にてプライマー作成し、FasL, TNF, Fas, TNFR, Bcl-2, Bax遺伝子発現の変化を検討した結果、濃度依存性、時間依存性の増強が確認された。６）ペリオスチン発現：遺伝子発現およびタンパクレベルの両評価において濃度依存性、時間依存性の増強が示された。
以上、LPCと酸化脂肪酸（変性脂質）によるコランギオパチーが惹起されることが示された。
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