研究課題
１．膵癌患者において肝転移に関わるmiRNAをアレイを行い4個同定した。膵癌患者のFFPEサンプルを用いて、肝転移の有無別に15例ずつvalidationを行った。3個は発現亢進、1個は低下していることが確認された。２．HPAF-II、PANC-1、PL45の3種類の膵癌細胞株を用い、上記で発現亢進のmiRNAについては、siRNA、発現低下のmiRNAにはmimicを投与し、マイグレイションアッセイ、インベイジョンアッセイを行い、遊走能、浸潤能に影響を与えるmiRNAを同定した。３．膵癌細胞株のエクスプレッションアッセイを用いて、遺伝子発現解析を施行した。IPA解析およびターゲットスキャンのデータベースを用いて、膵癌細胞株の発現より絞った2つのmiRNAのうち、それぞれ上位2つずつ標的遺伝子を選択した。４．次に膵癌細胞株を用いて、miRNA過剰発現を行い、それぞれの標的遺伝子発現を検討した。その結果1つの遺伝子のみ発現の低下を認めた。さらにRT-PCR、WBでも標的遺伝子の発現低下を確認した。５．上記遺伝子をノックダウンさせ、膵癌細胞株の浸潤能が増強されること、また、miRNAを過剰発現させても浸潤能が増強されることを確認した。浸潤能の増強の機序を検索するために、miRNA過剰発現時の上皮間葉転換（EMT）を調べたところ、EMTの増強が確認された。miRNA過剰発現時の増殖能を調べたが、増殖能には影響しなかった。さらに、miRNA過剰発現時における、5-FUによるアポトーシス誘導について検討したが、miRNA過剰発現によって、5-FUによるアポトーシスが抑制されていた。６．以上の結果から、本検討で見いだされたmiRNAは、膵癌患者における肝転移に関する有用なマーカーであり、miRNAがターゲットとする遺伝子を見出し、同遺伝子を介した機序を解明することができた。
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