研究課題
近年、新規に開発された免疫チェックポイント阻害療法が脚光を浴びている。なかでも抗PD-1抗体は、悪性黒色腫に続いて肺扁平上皮癌に対して生存期間の有意性が示された。しかし、その奏効率は低く、癌細胞が繰り出す免疫逃避機構には他分子の関与が想定される。PD-1ホモログは、新規にクローニングされた免疫チェックポイント分子であり、PD-1同様にT細胞に対して抑制的に作用する可能性がある。本研究においては、抗PD-1ホモログ抗体による新規抗体治療開発を目的としている。チオグリコレートにて誘導したマウス腹腔滲出性マクロファージのmRNAからマウスPD-1ホモログcDNAをRT-PCRによりクローニングした。組換え発現ベクターに導入し、マウスPD-1ホモログ-免疫グロブリンキメラ蛋白をチャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞に発現させ、培養上清からプロテインＧカラムを用いて可溶型マウスPD-1ホモログ-免疫グロブリンキメラ蛋白を精製した。これを抗原として、Sprague Dawleyラットの足底に皮下注射で免疫を行い、リンパ節B細胞を回収し、 マウスミエローマ細胞との細胞融合を行い、融合細胞（ハイブリドーマ）を作製した。CHO細胞にマウスPD-1ホモログを遺伝子導入し、ハイブリドーマのスクリーニングを行った結果、二つのクローンを得ている。PD-1ホモログの作用が未だ明らかではないことから、得られた抗体がアゴニスト抗体であるのかアンタゴニスト抗体であるのかが不明であるため、まず、OVA誘導性喘息モデルマウスに投与を行った。結果、気管支肺胞洗浄液中の細胞分画からはいずれの抗体投与においても悪化の可能性が示唆された。この結果、得られている二つの抗体はPD-1ホモログの作用が抑制性であるのであればアンタゴニストの可能性が示唆されたこととなる。
3: やや遅れている
本年度は、二つのクローンの解析を行っているが、現在、さらなる解析と並行して、あらたなクローンの作出を行っている。PD-1ホモログのカウンターパートが不明であり、機能解析もこれからであるため、抗体の機能的なスクリーニングがやや遅れている。
PD-1ホモログのカウンターパートが不明であり、機能解析もこれからであるため、抗体の機能的なスクリーニングがやや遅れている。このため、得られたクローンがアゴニスト、アンタゴニスト抗体のどちらであっても新規免疫チェックポイント分子抗体治療の基盤構築を可能とするべく、癌のアログラフトモデルでの解析のほか、多発性硬化症モデルマウスおよびアレルギー性喘息モデルマウスで解析を行っている。さらに、ヒトに応用する目的に抗ヒトPD-1ホモログ抗体を樹立する。ヒト培養細胞のmRNAからヒトPD-1ホモログcDNAをRT-PCRによりクローニングする。可溶型ヒトPD-1ホモログ-免疫グロブリンキメラ蛋白を精製し、マウスに免疫、リンパ節B細胞を回収、マウスミエローマ細胞と細胞融合を行った後、ヒトPD-1ホモログに結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマをスクリーニングする。マウスで作製することが困難な場合は、ラット、ハムスターなど免疫する動物種を変えて対応する。
抗体の機能的なスクリーニングがやや遅れているため、次年度使用額が生じている状況がある。
癌のアログラフトモデル、多発性硬化症モデルマウスおよびアレルギー性喘息モデルマウスにおける抗マウスPD-1ホモログ抗体の機能解析解析を継続するとともに、抗体作製を継続する。また、ヒトへの応用のために抗ヒトPD-1ホモログ抗体を樹立する。
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